gsk3β在乳癌细胞系中的表达及其与p38mapk相关性的研究.pdf

四 五、参考文献…………………………………………………………………………23 六、附录 综j苤………………………………………………………………………………………………………．．25 在校期间科研成绩………………………………………………………………36 致谢………………………………………………………………………………37 个人简介…………………………………………………………………………38 ·中文论著摘要· 相关性的研究 刖 吾 kinase，GSK-3)的亚型之一。 synthesis GSr．3p是糖原合成激酶3(glycogen 近年来越来越多的研究证实，Gsr．3p不仅仅参与糖原代谢过程，它更是一个多功 能激酶，在蛋白合成、细胞增殖、细胞分化、细胞运动以及肿瘤发生等方面都扮 演了重要角色。近来研究发现，GS飚D在乳腺癌的发生发展过程中起到了重要作 用，并参与了乳腺癌细胞生长和细胞凋亡信号通路调控。但是，GSK313是否参与 了乳腺癌细胞的转移仍然是个有待于研究的问题。p38MAPK是丝裂原活化蛋白激 酶(mitogen—activatedprotein 信号通路因以正性调节的方式参与肿瘤的侵袭转移过程而倍受关注。为此，本研 腺癌治疗提供相应的理论依据。 材料与方法 1、材料 购自北京协和基础医学院细胞中心，本实验由中国医科大学已有的细胞复苏而得。 (2)主要试剂鼠抗人p-p38抗体购自Cell 2、方法 ’ buffer裂解液，超声处理，高速低 (1)Western印迹法收集细胞加入RIPA 温离心提取总蛋白，用Bradford法进行蛋白浓度测定。SDS．PAGE电泳，转印， 封闭后加相应一抗、二抗。ECL发光，观察拍照，进行灰度值测定。 理、封闭后加相应一抗、二抗，复染细胞核，荧光显微镜观察拍照。 定，染色，观察拍照，进行细胞计数。 3、统计学分析 应用SPSSl3．0统计软件行数据处理：采用t检验分析WesternBlot图像灰度 异有统计学意义。 结 果 1、p-p38、p．GSK3p刚，GSK3p在乳腺癌细胞系中的表达 差别。 有微弱的表达。 24h后p-GSK3135a9和GSlOp变化 平，GSK邛无明显变化。 p-GSK3]B5啪胞浆表达减少，核表达增多。 MDA．MB．435s的侵袭转移潜能。 2 3、P38MAPK抑制剂SB203580对GSK313活性的影响 中p-p38，p-GSK3135a9蛋白的表达，但不影响OSK313蛋白的表达。 讨论 ‘ GSK313是一个多功能的蛋白激酶，它在蛋白合成、细胞增殖、细胞分化和细 胞运动等方面发挥重要作用。GSK3p的活性主要通过3种不同方式共同调节：(1) 胞周期的调控、促进肿瘤发生的活性才得以发挥；(3)底物磷酸化水平的不同调控 OSK3p活性。大部分Gsrdl3的底物都必须首先被其他激酶磷酸化(一次磷酸化)， 才能被GSK3p识别并受其磷酸化(二次磷酸化)。因此底物的磷酸化水平改变底物 的可识别性，从而调控GS飚D的活性。目前，有关GSK3J3对肿瘤的作用究竟是 抑癌还是促癌，尚无定论。 p38MAPK信号通路能通过磷酸化作用激活多种转录因子，参与调节细胞反 p38MAPK抑制剂SB203580可抑制细胞的运动。 本文通过观察GSK313的活性变化对乳腺癌细胞侵袭能力的影响，发现，随 蛋白表达呈递增趋势；而总GSK3p表达无明显差别，提示osrol3活性与乳腺癌 的降低可以增加乳腺癌细胞系MDA．MB．435s的侵袭能力。我们又进一步进行了 乳腺癌细胞系免疫荧光定位，结果显示：p-GSK313sa