hbsag和b9 vp2复合抗原的基因克隆及表达.pdf

VP2复合抗原的基因克隆及表达 HBsAg和B19 硕士研究生 张世杰 导 师 赵国强 郑州大学基础医学院微生物与免疫学教研室(郑州450052) 摘 要 背景与目的： Parvovirus 人微小病毒B19(Human B19)是微小病毒科微小病毒属中目前已知 的唯一使人类致病的病毒，也是动物病毒中体积最小结构最简单的DNA病毒。主 要经呼吸道和血液途径传播，可引起社区局部流行。自1990年首次证实我国存在 该病毒后，陆续报告B19病毒感染是我国孕妇非免疫性流产、儿童急性再障危象、 急性血小板减少性紫癜等疾病的重要病因之一。现己证实该病毒同多种儿蕈及成 人疾病有关。同时，我国妇女和儿童血清中保护性抗体水平低，易发生该病毒感 染。尤其免疫功能低下或缺陷患者可发生持续感染和慢性贫血，危及生命。且随 着检测手段的改进及研究的深入，其疾病谱还在不断扩大。B19病毒基因组长约 衣壳蛋白主要由VP2蛋白组成，VPl蛋白不超过衣壳蛋白的lo％，其独特区暴露在 病毒的表面。B19病毒感染引起的机体免疫反应主要是针对其结构蛋白VPl和VP2， 而VPl除在其氨基端有一227个氨基酸的独特区外，其余与VP2相同。乙型肝炎 病毒(HBV)的感染在人群中比例很高，且感染后体内能形成的主要保护性抗体为 和HBV复合抗原系统，并检测此复合抗原的抗原性，给HBV和B19病毒重组多价 疫苗的研制和复合诊断试剂提供抗原。 方法： 别加入一定的内切酶位点。利用PcR和分子克隆技术，从含HBV病毒全基因的重 入JMl09大肠杆菌中，利用氨苄青霉素抗性、蓝白筛选筛选出阳性克隆，并以PcR 等方法对阳性菌进行鉴定，从而构建出pGEM．T～HBs及pGEM—T—VP2并测序分析； 表达情况，并用western_blot鉴定融合蛋白的抗原性。 结果： 1．靶基因扩增：以含有B19病毒全基因的质粒为模板，利用PcR扩增得到vP2目 点共694个碱基对。 果均与GenBank公布的一致。 分子量大小与预期的一致(“lKD)。 结论： 双重抗原性，从而建立了表达HBsAg和B19VP2蛋白复合抗原表达系统，同时给 HBV和B19病毒重组多价疫苗的研制和复合诊断试剂提供了抗原。 关键词：B19vP2：HBsAg：多价疫苗；原核表达 Ⅱ of of and CloningconIbiningantigenHBsAg human B19VP2and parv0Vims its髓p肿ssi蛐in忍．co雎． P∞tg刚岫tezbⅫgS埘ie 1、ltor zhao Guoqing and Depc曲en￡ofMicrobi0109yhnmunojo秭 ofB踮ic 450052 CoⅡege Medi咖Science，zheⅡgdlouUniVersity，zllengzhou Abstract and Back缈undObj∞如e： Human knDwnlobe in p盯VovjnlsB19(B19)，11le0nly pan，ovinls patbogenjc thc Pafvovinlsinthe PaⅣ0Viridae．Itisthe ge