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Y 618301 HCC患者PBMCs中逆转录酶P基因的表达与x P基因整合的研究 HCC患者PBMCs中HBV逆转录酶P基因的表达 与X、P基因整合的研究 青岛大学医学院2001级病原生物学专业 硕士研究生 王淑霞 导 师 吴力克王斌教授 摘要 目的：研究在原发性肝细胞癌(HCC)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中乙 型肝炎病毒(HBV)DNA多聚酶／逆转录酶P基因的表达与X、P基因整合的关系，阐 明liBV的整合机制以及肝细胞癌的发病机制。 方法：选择HBsAg阳性的原发性肝癌病人40例，其中I期患者4例，II期 阴性的原发性肝癌患者和5例HBsAg阴性的健康体检者作阴性对照和健康对照。提 P2及X1 合成HBV的P基因及X基因引物P1 x2，以逆转录合成的eDNA为模板，用 编码DNA多聚酶／逆转录酶的P基因引物行RT—PCR扩增，以检测HBV逆转录酶P基 因在PBMCs中的表达情况；以提取的总DNA为模板，分别用P基因及x基因引物行 PCR扩增，以检测P、X基因在PBMCs中的整合情况。 课题受青岛市科技局基金项目(编号青科计字[2001128号)资助 Hcc患者PBMCs中逆转录酶P基因的表达与x P基因整合的研究 结果：用引物x1、x2扩增细胞基因组中整合的HBVx基因片段，40例中3l 用于扩增细胞基因组中整合的HBVP基因片段，40例中6例阳性，表明HBV的P基 义(PO．01)，提示x基因片段的整合率显著高于P基因片段，这与肝内有关研究 数据成平行关系，说明研究PBMCs中HBV的整合情况可以反映肝内的状态。以P1、 阶段病毒处于静止状态，整合发生于长时间以前。其中I、II期X整合率为72．2％ 在I+II、III期原发性肝癌中，其X、P基因整合率及P基因的表达率差别均无统 表达率均差别也均无统计意义(PO．05)。 结论：在HCC阶段HBV病毒处于复制的相对静止阶段，HBV的整合开始于感染 X基因的整合 X基因片段的整合率显著高于P(S)基因片段，说明HBV 的早期。HBV 及表达是HCC发生的主要因素。 [关键词]原发性肝细胞癌：乙型肝炎病毒X、P基因；外周血单个核细胞；整合 聚合酶链反应 HCC患者PBMCs中逆转录酶P基因的表达与x P基因整合的研究 The between ofHBVP and ReIationshiP ExpressiORgene ofHBV PGeneandXGeneinPBMCs ofHCC IntegratiOn Patients (Abstract) 0b To themechanismofHBVDNA andthe lectiveinvestigate