hcvhbv复抗原的免疫原性的初步研究.pdf

摘要 乙型肝炎和丙型肝炎是两种目前严重危害人类健康的传染病， 前者已有较成熟的基因工程疫苗，而后者还没有有效的预防疫苗。 为了探讨HCV／HBV复合抗原PCX(多表位基因)／S(表面抗原)的免 疫原性．我们分别从DNA免疫和蛋白免疫的角度来探讨HCV／HBV 复合抗原在动物诱导产生的免疫反应，其基本方法为：l，将合成 的HCV复合多表位抗原基因PCX与HBV的S抗原基因融合于真核 表达载体pcDNA3．0，进行DNA免疫；2，把PCX克隆于pBV220载 体上，进行表达、纯化，然后将纯化的PCX蛋白和S蛋白按一定的 比例混合进行蛋白免疫。 ～ f‘DNA免疫实验中，将编码PCX和s基因抗原的重组质粒直接注 射到Balb／c小鼠股四头肌内，按每只小鼠lOOug／lOOul的剂量经 三次免疫后，检测小鼠的细胞和体液免疫应答。用ELISA的方法 检测PCX和S抗原的体液免疫应答，结果为：免疫后8周抗一 HBsAb阳转率为40％，到第12周达到10096，而抗-HCVAb在免疫后 12周阳转率为66％，在第15周达到100％，而且其O矾。值明显低 于抗一HBsAb的oD值。在3H-TdR渗入法检测T淋巴细胞增殖实验 中，分别用s和PCX蛋白刺激体外培养的被免疫小鼠的脾细胞后， 均能出现明显的T细胞增殖(PO．05)。采用”Cr释放法检测特异 性CTLs杀伤作用，发现对与PCX和s蛋白孵育后的靶细胞P815 ’ 有明显的杀伤作用(PO．05)。 中国坼和医科^学中国医学科学院硕士乍论文 在蛋白免疫实验中，免疫后5周5ug，10ug及15ug三组的 阳转率也只有66％，其OD。。。值明显低于抗一HBsAb的0D值。被免疫 白孵育后的靶细胞P815有明显的杀伤作用(PO．05)，但对PCX孵 育后的靶细胞的杀伤作用更明显。V一 ／ 初步的实验结果说明，复沓型PCX／S抗原具有较好的免疫原 性，DNA和蛋白免疫都是有效的诱导特异免疫应答的方法。而且 DNA免疫在诱导抗原特异的CD8+T细胞免疫反应上占优势，蛋白免 疫则在体液免疫反应方面上占优势。这些初步的工作为以后 HCV／HBV双价疫苗的研究提供了一定的实验数据。 关键词：DNA免疫；蛋白免疫；多价疫苗；多表位抗原基因P瓯 乙肝病毒表面抗原；免疫应答 中国协和医科大学中国医学科学院硕士生论文 Abstraet HCVandHBV health Facing infections，themajorpublic problem， done． stilInotbeen has HCVvaccine HBVvaccinebeenintroduced．but the of to Inorderto a corresponding antigen explorepossibilityhybrid DNA and andHBV．weimmunizedmicewithcombined HCV plasmid of combined