hcmv感染对管内皮细胞icam-1表达的影响及药物干预的作用.pdf

中 文 摘 要 HCMV感染对血管内皮细胞 ICAM一表达的影响 及药物干预的作用 摘 要 目的:动脉粥样硬化 (Atherosclerosis,AS)是严重危 害人类健康和生命的动脉性疾病，但迄今其发病机制还不很 清楚。近年来，逐渐认识到AS是一种血管壁的慢性炎症， 是内皮细胞对损伤因素的反应P1，因此，自1978年Fabricant[2) 用禽类疤疹病毒成功诱发火鸡冠状动脉粥样硬化以来，越来 越多的研究显示作为其中一员的人巨细胞病毒 (human cytomegalovirus,HCMV)感染与动脉粥样硬化有相关性。 由于HCMV在人群中感染非常广泛，可潜伏于多种细胞， 当机体免疫低下时可重新激活造成严重感染，使HCMV成 为动脉性疾病发生的最可能的致病因素。 大多数研究者认为，HCMV的反复潜伏再激活可造成血 管炎症反应，进而影响动脉性疾病的发生、发展以及稳定性 [31。其中主要的分子机制之 一是由于HCMV感染引起机体免 疫损伤而加速疾病的进展。细胞间粘附因子一1(intercellular adhesionmolecule-1,ICAM-1)是细胞表面的一种可被诱导的 糖蛋白，可在造血祖细胞和非造血祖细胞表达，能介导免疫 细胞与其他细胞间的相互作用，参与细胞粘附和移行，在炎 症和免疫反应中起核心作用4[1。有研究发现[s1,HCMV感染 可直接引起血管内皮细胞超微结构、代谢和功能等发生改 变，但其对ICAM-1动态表达的影响尚缺乏研究。 磷 甲酸钠 (foscametsodium,PFA)和更昔洛韦 中文 摘 要 (ganciclovir,GCV)为广谱抗DNA病毒药物，对HCMV 均有较强的抑制作用。嶙甲酸钠属于非核昔类药物，通过直 接作用于病毒的核酸聚合酶而达到抗病毒的效果。更昔洛韦 为核营类抗病毒药物，可抑制巨细胞病毒DNA的合成，减 缓病毒DNA的延伸而抑制巨细胞病毒的复制。木研究用 HCMV感染血管内皮细胞，动态观察ICAM-1基因表达，明 确 ICAM-1在病毒感染时表达的时限性，初步探讨HCMV 感染导致AS发生和发展的关系和可能机制;应用麟甲酸钠/ 更昔洛韦对病毒感染的细胞进行干预，观察药物对 ICAM-1 基因表达的影响，为与AS相关的疾病提供新的治疗依据。 方法:(1)按常规方法分别在人胚肺成纤维细胞(Human embryoniclungfibroblasts,HELF)和血管内皮细胞 (Vascular EndothelialCell,VEC)培养HCMVAD169,观察细胞的病 变效应。将在这两种细胞培养的病毒分别进行 10倍系列稀 释，用微量法滴定病毒滴度，比较HCMV在这两种细胞的 增殖能力。(2)用四哇盐(MTT)比色法测定不同浓度的PFA (12.5,25,50,100,200,400,8001aM)与不同浓度的 GCV(12.5,25,50,100,125,250,500ug/ml)对细胞 的影响 以及对不 同滴度 的病毒 (1, 10, 100, IOOOTCID5汹.1m1)的抑制作用，从而选择试验所需药物浓 度和病毒滴度。(3)取对数生长期的VEC，分为细胞对照组、 GCV组、PFA组、HCMV组、GCV+HCMV组和PFA+HCMV 组。根据分组先用病毒感染，吸附 lh后，在相应组分别加 入腆tit酸钠或史昔洛}J，于培养Oh,2h,4h,6h,8h,12h, 24h,36h时，提取细胞总RNA，用半定量RTPCR技术检 测各组细胞ICAM-1mRNA的表达。 2 中 文 摘 要 结果:(1)HCMV感染HELF后24-48h即可出现细胞 病变，细胞肿胀，由纤维状变为圆形，折光性增强，随后形 成蚀斑，细胞质颗粒增多，形成巨细胞，最后细胞死亡脱落。 而HCMV感染VEC48h后，出现细胞肿胀、核增大，形态 由多角形变为圆形，72h后细胞间界限模糊，多个细胞融合 形成巨细胞，最后细胞脱落死亡。根据Reed-Muench法计算 病毒滴度，在HELF和VEC培养的病毒滴度分别为1X1护和 1X10