hctgf在酿酵母中的表达及其与fgf的基因反应差异.pdfVIP

中■rt掣q惴嗣!中脚’留神匿稃^掌曩r士’耀嚏 摘 要 人结缔组织生长因予(hCTGF)是一种富含半胱氨酸的生长因子，由人成 纤维细胞和血管内皮细胞合成分泌，分子量为38KD。CTGF能够促进成纤维 细胞和血管内皮细胞的分裂增殖，细胞外基质产生和细胞粘附作用，从而在 血管生成、创伤修复和胚胎发育过程起着重要作用。尤其是在促进伤口愈合 ‘ 中，是一种很有效和应用前途的多肽类药物。本研究根据CTGF的结构特点， 选择真核表达系统酿酒酵母进行表达研究。实验以pBVCTGF为模板，经 PCR扩增获得目的基因，并在此基础上以加上Kazak序列，克隆到载体pUCl9 上进行序列分析，证明获得的基因片段核苷酸序列与预期一致。序列正确的 CTGF片段插入到酵母表达载体pYES2中，同时引入。因子前导肽基因，进 行分泌表达研究 质粒转入酿酒酵母INVScl细胞进行诱 导表达，并对培 添加分泌信号的克隆表达产物在胞内 出现，而未添加分泌信号的则未见明显表达。经MTT法证明CTGF和碱性 成纤维细胞生长因子(bFGF)一样，都具有促进二倍体细胞KMB．17增殖的 作用，但在促增殖过程中CTGF和bFGF诱导的基因反应有所差异：CTGF 诱导细胞表达c，myc，而bFGF促进c．fos表达增加；此外两种因子均诱导与 酪氨酸磷酸化过程密切相关的c．src基因表达。从而初步了解了CTGF在细胞，一7 、，—一——一2 内的信号传导途径以及与bFGF的差别。)本实验为进一步研究丌发结缔组织 ／ 生长因子，和探索其作用机制奠定了堙论基础和试验途径。 关键词； 结缔组织生长因子(cTG爿酿酒酵母／表达， 碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)y釜因反应√ 十|E掌科掌院中∞协$E}}^掌Ⅲt诧’x Abstract tissue is and connective Human factor(hCTGF)，whichproduced groⅢh anovel vascularendothelial and secretedfibroblast cell，is cysteine-rich， by include of CTGF functionsof secretedfactor．The promotingproliferation growth and endothelial ofextracellularmatrix andvascular fibroblast cell，production thatCTGFall indicate ofcells．Taken activitie