hiv-1 g41第二优势表位簇在大肠杆菌中的高效表达.pdf

锬蒜嚣豢疵39㈣在大肠杆菌中的高效表达 ，～。u“’ 病原生物学专业研究生 李文利 指 导 教 师 王 斌 教授 摘 要 ELISA检测试剂 目的 提供高质量的重组膜抗原是提高HIV 质量、提高gp41抗体检测特异性和灵敏性的的最重要的环节。本 课题构建了HIV—l SF2株跨膜蛋白gp41第二优势表位簇基因的原核 高效表达克隆，初步检验该融合蛋白抗原性，探讨将其作为侯选多 肽用于制备诊断试剂、检钡UHIV．1抗体的可能性；并探讨提高原核 表达的途径。 ，方法利用密码子的兼并性，在保证目的基因编码氨基酸不变 和不改变引物特异性的前提下，在PCR上游引物引入突变碱基。然 后，通过聚合酶链式反应扩增HIV．ISF2毒株跨膜蛋白gp4l基因片 91 60的第649-675位氨 段(nt53—9233)。该基因编码相当于gpl 基酸残基，即gp41的第二优势表位簇。PCR产物和融合蛋白表达 a。获得含重组质粒的宿 pGEX一4T一2／SE，并转化表达宿主菌DH5 主菌，经IPTG诱导，高效表达出HIV一1第二优势表位簇融合蛋 白，产物经SDS—PAGE，使用凝胶成像系统扫描目的融合蛋白的含 量百分比，并进行Western．B】ot检测其与HIV一1阳性血清及正常人 血清的反应。 结果 获得了表达HIV一19p4l第二优势表位一GST融合蛋白的 重组菌DH5 a，经IPTG诱导，融合蛋白得到高效表达。凝胶成像 系统扫描SDS．PAGE电泳结果表明，融合蛋白表达量占总菌体蛋白 主塞翅塞 l／“ 血清发生特异性反应，而与阴性血清不发生反应。∥ 结论在原核表达体系中高效表达HIV．1 gP4l第二优势表位 簇，该重组蛋白具有良好的抗原性，可以作为HIv．1 ELIsA筛查试 剂的侯选抗原；并对提高外源基因在大肠杆菌中的表达水平进行了 有益的探索。 关键词HIV—l：p41：基因表达；免疫优势表位；融合蛋白 ／ ， ＼／ k／、／ ’√ 、 HIV-11 of Imrnunodominant TheSecond Epitopes gp4 Efficient inE．coli Expression Abstract histhemost to Objective importantwayprovideⅢv·1gp41 the ofHIV一1