紫外可见分光光度法培训课件要点.pptVIP

电磁波谱 二、岛津UV2550定量分析步骤（标准曲线法） 先开主机，然后再打开UVPROBE软件； 启动UVPROBE以后，点击界面下方“连接”进行仪器连接，仪器进行连接检查，待检查全部通过后，点击“OK” 点击“光度测定”； 点击“方法”，波长设定为通过光谱检测到所测样品的最大吸收波长,然后加入波长，类型多选择为“多点”，WL1=最大波长。 点击“下一步”，（注：根据所测样品对相应的参数进行设定），“方法”设定完后，点击“关闭”； 将两个空白参比放入光束吸收池架； 点击“自动调零”； 双击标准表中的任意位置激活标准表，在表头位置将显示激活； 点击下拉菜单中的I-扣空白； 在标准表中依次输入标准系列ID； 读取标准样品：将两个空白参比放入光束吸收池架，点击“自动调零”，然后放入样品，输入样品浓度，依次进行“读取”。样品的浓度读取完后，在“标准曲线”表中点击“右键”-“属性”中选择“方程式”、“相关系数”，查看标准曲线； 样品读取：点击样品表中的任意位置激活标准表，在表头位置将显示激活； 在样品表中输入样品ID，放入待测样品，进行“读取 ”。 打印结果：点击文件-打印-（选择打印标准表或样品表） 关机：点击操作界面“断开”，然后关闭仪器电源，关闭操作软件，关闭电脑，将比色皿倒扣放置保存。 二、工作台要求 １、可承受压力 35Kg+25Kg（PC） ２、最小尺寸 ：长：1120mm，宽：710mm，高：520mm 三、电源要求 １、供电电压：100/120/220/230/240V 交流±5% 50/60Hz ２、功率消耗：约190VA ３、保险丝使用：100 - 120V供电，5A ；220-240V供电，3.15A ４、安装地点具备可靠的仪器接地端子 则 ?A = lg I1/ I2 =（? ?1 -? ?2）bC 因此测量两波长 吸光度之差，就 消除了背景吸收 的干扰。 显色反应及显色条件的选择 显色反应 将待测组分转变成有色化合物的反应 显色剂 与待测组分形成有色化合物的试剂 五、无机分析应用 显色反应类型 络合反应 氧化还原反应 取代反应 缩合反应 选择要素 灵敏度高(?大) 选择性好(无特效显色剂) 有色生成物稳定 组成恒定(不同络合比颜色不同) 显色剂在测定波长处无明显吸收 有色化合物与显色剂颜色对比度大，要求△? 60nm。 * 显色条件的选择 1.显色剂用量 2.反应体系的酸度 影响金属离子和显色剂的存在形式、络合物组成、稳定性及反应进行程度 显色条件的选择 3.显色时间 4.显色温度 5.溶剂 6.干扰的消除 选择适当的显色反应条件 加入掩蔽剂 分离干扰离子(萃取法、离子交换法、吸附法等） 吸光度测量条件的选择 1.选择适当的入射光波长 一般应该选择λmax为入射光波长。但如果λmax处有共存组分干扰时，则应考虑选择灵敏度稍低但能避免干扰的入射光波长。 2.控制适宜的吸光度（读数范围） Tmin＝36.8%, Amin＝0.434（吸光度测量误差最小） 最佳读数范围 T %=70 ％ ～10％ A = 0.15～0.85具体待定 * 3.选择合适的参比溶液 若仅待测组分与显色剂反应产物有吸收，其它试剂均无吸收，用纯溶剂（水)作参比溶液； 若显色剂或其它试剂略有吸收，试液本身无吸收，用“试剂空白”(不加试样溶液)作参比溶液； 若待测试液有吸收，而显色剂等无吸收，则可用“试样空白”(不加显色剂)作参比溶液。 * 定性分析 结构分析 标准谱图对照 经验规则计算 官能团鉴定 顺反异构体的确定 互变异构体的确定 五、有机分析应用 * 化合物的定性分析 利用紫外光谱可以推导有机化合物的分子骨架中是否含有共轭结构体系,如C=C－C=C、C=C－C=O、苯环等。利用紫外光谱鉴定有机化合物远不如利用红外光谱有效，因为很多化合物在紫外没有吸收或者只有微弱的吸收，并且紫外光谱一般比较简单，特征性不强。利用紫外光谱可以用来检验一些具有大的共轭体系或发色官能团的化合物，可以作为其他鉴定方法的补充。鉴定化合物主要是根据光谱图上的一些特征吸收，特别是最大吸收波长λmax即摩尔吸光系数ε值，来进行鉴定。 * 鉴定的方法有两种： （1）与标准物、标准谱图对照：将样品和标准物以同一溶剂配制相同浓度溶液，并在同一条件下测定，比较光谱是否一致。 （2）吸收波长和摩尔吸光吸收：如果样品和标准物的吸收波长相同，摩尔吸光吸收也相同，可以认为样品和标准物是同一物质。 化合物的定性分析 * ⑴若在200～750nm波长范围内无吸收峰，则可能是直链烷烃、环烷烃、饱和脂肪族化合物或仅含一个双键的烯烃等。不含共轭体系，无醛、酮、溴、碘。 官能团鉴定 ⑵若在