罗氏沼虾气单胞菌MrM0602株的分离与致病性研究.pdfVIP

罗氏沼虾气单胞菌MrM0602 株的分离和致病性研究 1,2 2 2 1,2 张友平 ，王军毅 ，刘问 ，钱冬 1 宁波大学生物工程与生命科学学院，浙江宁波（315211 ） 2 浙江省淡水水产研究所，浙江湖州（313000 ） E-mail ：zhangyouping1112@163.com 摘 要：从濒死罗氏沼虾体内分离到菌株MrM0602, 经形态学观察及API 20E 鉴定系统将 其鉴定为嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila ）。人工感染健康罗氏沼虾，其100%致死剂 4 3 量为 1×10 CFU/ml ，半致死剂量（LD50 ）为3.16×10 CFU/ml。测定菌株MrM0602 的胞外 产物对小鼠、新西兰大白兔及甲鱼红细胞的溶血活性，表明胞外产物对甲鱼红细胞有一定 的溶血活性，对小鼠红细胞有微弱的溶血活性，对新西兰兔红细胞无溶血活性。胞外蛋白 酶活力测定表明，菌株MrM0602 胞外产物具有很高的蛋白酶活力，且具有很强的耐热性。 常规药物敏感性实验表明，菌株 MrM0602 对环丙沙星和恩诺沙星高度敏感，对环丙沙星 和复方新诺明敏感。 关键词：罗氏沼虾，气单胞菌，致病性，胞外产物 罗氏沼虾( Macrobrachium rosenbergii) 重15~20g；小白鼠，新西兰大白兔购自浙 又名马来西亚大虾,具有生长快、肉质鲜美、 江省医科院实验动物中心，健康甲鱼购自 养殖周期短、经济价值高等优点,是一种优良 湖州市某甲鱼养殖场。 的淡水养殖品种。我国1976年开始引种罗氏 胰胨大豆琼脂（TSA ）为 Difco 产品； 沼虾，1977人工育苗成功后在广东、广西、 Azocasein 为Sigma 产品；细菌生化微量鉴 江苏、上海等都有养殖。随着全国罗氏沼虾 定管、常规药敏纸片购自杭州天和微生物 养殖规模的不断扩大，各种病害相继出现， 试剂有限公司，API 20E 鉴定系统为法国 [1] 生物梅里埃有限公司（bioMerieux ）产品。 以病毒病为主 ，近年来细菌病也有上升趋 势，逐渐成为了影响罗氏沼虾产业的发展的 1.2 方法 主要病害，目前已报道的细菌病原主要有： 引起养成虾疾病的肠球菌、木糖葡萄球菌、 1.2.1 细菌分离 温和气单胞菌和引起越冬亲虾的酵母菌、莫 取患病罗氏沼虾的肌肉和肝胰腺，无 格球拟酵母等[2~7] 。 菌操作接种于 TSA 培养基，置 28 ℃恒温 2006年8月，江苏省高邮市罗氏沼虾养 培养24h ，挑取单菌落进行纯培养。 殖成虾发病频繁，患病虾主要为成虾，体长 取非发病虾塘死亡虾的肌肉和肝胰 8~10cm，体重15~20g，体表无明显症状。 腺，无菌操作接种于TSA 培养基，置28 ℃ 作者对发病虾体进行了病原分离，从患病虾 恒温培养24h ，挑取单菌落进行纯培养。 体内分离到致病性菌株MrM0602，并对该菌 菌株T0608 由本实验室分离自发病甲鱼。 株的致病性、胞外蛋白酶活性，溶血活性及 1.2.2 人工感染 药物敏感性等实验进行了相关研究，以期为 罗氏沼虾细菌病的防治提供一些理论依据。 将供试菌株接种于TSB 培养液，培养 24h 后的菌悬液分别稀释10 倍