家蚕素_基因原核表达和蛋白纯化_徐欣.pdfVIP

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2016-03-04 发布于安徽
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家蚕素_基因原核表达和蛋白纯化_徐欣.pdf

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: 昆虫学报Acta Entomologica Sinica ，January 20 14 ，57 (1) 8 － 12 ISSN 0454 -6296 家蚕素Ⅱ基因原核表达及蛋白纯化 1 1 1 1 1 ，，，，，徐欣刘朝阳崔海波杨洋郭晓琪 2 1 1 ，* ，，张涛刘庆信崔为正 (1．， 27 10 18 ;2 ．， 27 1000) 山东农业大学林学院山东泰安泰安泰山成通制丝有限公司山东泰安 :【】、 (bombyxin- ，BBX ) 。【】ＲT- 摘要目的建立一种简便快速且能大量获得家蚕素Ⅱ Ⅱ Ⅱ 的有效方法方法运用 PCＲ bombyxin- cDNA ，，技术得到 Ⅱ基因全长序列采用原核表达技术对该基因进行异源表达并利用亲和层析的方 BBX 。【】 Bombyx mori mＲNA bombyxin- cDNA ，法得到纯化的 Ⅱ蛋白结果从家蚕头部中经过反转录获得 Ⅱ基因的 pET28a-BBX ， (IPTG) ， BBX ，并构建了原核表达载体 Ⅱ 经过异丙基硫代半乳糖苷诱导使 Ⅱ获得了大量表达进一 HisTrap HP ， BBX 。【】，步用亲和层析成功得到大量纯化的 Ⅱ 结论本实验建立的原核表达方法和蛋白纯化技术 BBX ， BBX ，是大量制备 Ⅱ的一种简易而有效的方法为进一步开展的分泌机制和作用机理研究以及利用原核表达系统研发BBX 降血糖药物奠定了基础。 : ; ; ; ; ; 关键词家蚕类胰岛素肽家蚕素基因克隆原核表达蛋白纯化中图分类号:S881． 2 文献标识码:A 文章编号:0454-6296 (2014)01-0008-05 Prokaryotic expression and purification of bombyxin-Ⅱ in