内标多重荧光RT_PCR同时检测肠道病毒71型与柯萨奇病毒A16型.pdfVIP

Re se arch Pap er 研究报告 微生物学报 Acta Microbiologica Sinica 49 ( 1) :98 - 104 ; 4 J anuary 2009 ISSN 0001 - 6209 ; CN 11 - 1995Q http :journals. im. ac . cnactamicrocn 内标多重荧光 RTPCR 同时检测肠道病毒 71 型和柯萨奇病毒 A16 型 1 ,3 2 1 2 3 1 3 1 1 肖性龙 ,何雅青 ,余以刚 ,杨洪 ,李惠芳 ,杨晓泉 ,张经纬 ,陈谷 ,刘冬梅 , 1 1 李小凤 ,吴晖 (1 华南理工大学轻工与食品学院食品安全研究室 ,广州 510640) (2 深圳市疾病预防控制中心 ,深圳 518000) (3 深圳太太基因工程有限公司 ,深圳 518057) 摘要 :【目的】为对当前爆发的手足口病进行快速准确的检测 。【方法】本研究建立了含内标的同时检测 EV71 和 CA16 的多重荧光 RTPCR 方法 ,对该方法的特异性 、灵敏度等进行评估 ,并对 400 多份临床样品进行了检 测 。【结果】实验结果表明 ,该检测方法特异性强 ,对 10 株 EV71 病毒 、8 株 CA16 病毒和 25 株其他人类病毒 进行了检测 ,特异性为 100 % ;该检测方法对 EV71 和 CA16 的检测灵敏度分别达到 01 TCID 和 1 TCID ;将 50 50 4 01～10 TCID50 mL EV71 和 CA16 样本进行重复性实验 ,其变异系数分别为 09 %～20 %和 09 %～23 % 。 对 400 多份临床样品分别进行荧光 RTPCR 检测和传统方法检测 ,结果显示 ,荧光 RTPCR 对 EV71 和 CA16 ( ) 的阳性检出率平均为 461 %和 142 % , 比传统方法 345 %和 128 % 的阳性检测率高 。另外 ,实验数据显 示 ,在粪便 、直肠拭子 、咽喉拭子样本中 ,PCR 抑制物存在的比例为 18 %～34 % ,表明内标对监控 PCR 抑制 物的存在具有重要作用 。【结论】本方法能同时对 EV71 和 CA16 进行快速检测 ,并且灵敏度高 ,特异性好 , 由 于加入了内标 ,能有效地监控假阴性的出现 ,适合于手足口病的临床检测 。 关键词 : 内标 ;多重荧光 RTPCR ; EV71 ;柯萨奇病毒 A16 型 ;检测 中图分类号 :Q933 　　文献标识码 :A 　　文章编号 (2009) ( ) 　　手足口病 hand foot and mouth disease ,HFMD 是 已被中华人民共和国卫生部定为一类传染病 。因 ( 全球性传染病 ,研究表明 ,肠道病毒 71 型 enterovirus 此 ,快速 、简单 、高灵敏度的检测方法对该病的防控 ) ( 71 ,EV71 和柯萨奇病毒 A16 型 coxsackievirus A16 , 极其重要 。经典的检测肠病毒的方法多采用细胞培 CA16) 是引起人类手足口病的两种主要病原[ 1]