江苏某规模化猪场回肠炎感染状态和防控建议(2012年5月《猪业科学》投稿).docVIP

江苏某规模化猪场回肠炎感染状态监测与防控建议 曲向阳1,2 （1. 美国礼来亚洲公司上海代表处，上海，200021；2.南京农业大学动物医学院，江苏南京，210095；） 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： 猪回肠炎又名增生性肠炎、增生性出血性肠炎, 是由胞内劳森氏菌(Lawsonia intracellularis)感染所致的以回肠、盲肠、结肠粘膜呈腺瘤样增生为主要特征的一种重要猪肠道疾病。该病易感染生长育肥猪、后备母猪，严重影响猪只饲料效率与生长速度，对养猪业的经济效益影响严重[1]。据Jensen报道，在美国每头回肠炎感染猪的经济损失至少1.531美元[2]。 依据临床症状差异，本病可分为急性型、慢性型与亚临床型。急性型多发于后备母猪及17周龄以上的育肥猪，健康猪群似乎更易感染急性型回肠炎[3]。常表现为出血性下痢（图1），甚至突然死亡。慢性型与亚临床型回肠、盲肠与结肠增厚（图3），粪便无成型（图4），但无典型临床症状，2周龄～20周龄的猪只均易感染[4] ，无法依据临床症状进行诊断。 本试验采用Lawsonia FIRSTtest TM回肠炎诊断试剂盒对该猪场粪便样品中的胞内劳森氏菌进行了监测，以期了解回肠炎的感染状态与感染时间点，为精准化策略性用药预防或疫苗免疫提供实验依据。 图1：后备母猪急性出血性下痢； 图2：回肠、盲肠等部位出血； 图3：慢性回肠炎，肠粘膜增厚，呈脑回状； 图4：慢性回肠炎导致粪便松软 1 材料与方法 1.1 样品采集 2011年12月，在江苏省某规模化猪场随机采集特定周龄的新鲜松软或水泥样的粪便样品，各3克。样品主要来自于4周龄、6周龄、8周龄、10周龄、12周龄、14周龄、后备母猪与经产母猪，每阶段作2～3份重复，采样后立即检测。 1.2 检测试剂 本检测采用德国Microcoat公司开发的Lawsonia FIRSTtest TM回肠炎现场诊断试剂盒（免疫磁珠法，美国礼来公司拥有专利权）。其原理与双抗体夹心ELISA类似。以包被在磁珠上的多克隆抗体捕捉粪便中的胞内劳森氏菌，然后通过连接在多克隆抗体上的过氧化物酶（POD）催化TMB显色，通过颜色变化，对胞内劳森氏菌的感染状态进行定性检测。通过对比颜色变化，对胞内劳森氏菌的感染状态进行半定量检测。（图5）。 图5：FIRSTtestTM 试剂盒作用原理图 1.3检测方法 依照FIRSTtestTM试剂盒说明书进行，步骤如下。①样品稀释与沉淀：将1g粪便样品与5mL样品稀释缓冲液在样品收集管中混合，摇匀后，放在试管架上静置5min；②样品转移：分别使用不同的移液管吸取0.5mL的上清液至分析管（管内含有劳森氏菌多克隆抗体包被的免疫磁珠）中，设立阳性对照组（阳性对照为0.5mL劳森氏菌菌液），摇匀后，将分析管放在试管架上孵育30min；③磁珠分离与洗涤：将分析管转移至磁体架上进行磁头分离，然后洗涤2次；④加入抗体－过氧化物酶共轭物：分别向分析管中加入0.5mL的抗体－过氧化物酶共轭物，摇匀后，将分析管放置在试管架上孵育20min；⑤磁珠分离与洗涤：同步骤③；⑥加入TMB显色：分别向分析管中加入0.5mL的TMB底物显色液，并设立阴性对照（阴性对照管内含有劳森氏菌多克隆抗体包被的免疫磁珠），摇匀后，孵育7分钟；⑦结果判读：将分析管放置在磁铁架上，记录颜色变化，阳性呈蓝色，阴性液体透明。 2 检测结果 FIRSTtestTM是一种定性检测劳森氏菌的方法，通过待检样品与阳性对照、阴性对照间的颜色对比（图6），将回肠炎在本场的感染状况汇总于表1。从检测结果可发现：4周龄与6周龄各有1份样品（33％）呈阳性，8周龄的样品胞内劳森氏菌检测呈阴性，而自10周龄保育仔猪起至14周龄的生长猪及母猪的胞内劳森氏菌检测均呈阳性，特别是14周龄与母猪样品呈强阳性。 4周 4周 4周 6周 6周 6周 8周 8周 8周 母猪 阴性 阳性 阳性 阴性 母猪 14周 14周 14周 12周 12周 12周 10周 10周 10周 图6 不同周龄猪粪样中胞内劳森氏菌的检测结果 样品 4周 6周 8周 10周 12周 14周 经产母猪 重复1 + + - + + +　 +　 重复2 - - - + + +　 + 重复3 - - - + + + 无样品 感染比 33% 33% 0% 100% 100% 100% 100% + 阳性 + 强阳性 — 阴性 PCR、免疫过氧化酶法检测粪便样品中的劳森氏菌或采用ELISA、IFA[5]。本检测采用的FIRSTtestTM检测可在猪场现场快速检测粪便中