辣椒色素的提取与分离讲解.docVIP

实验申请 实验项目：辣椒红色素的提取与分离 实验原料：干辣椒粉 实验仪器：水浴锅（80℃），索式提取器，旋转蒸发仪，真空泵，层析柱 试剂：丙酮，石油醚，硅胶 耗材及辅助器材：滤纸 电子天平 脱脂棉 试管若干 圆底烧瓶一个 玻璃 棒1 支 漏斗 玻璃毛细管 烧杯 量筒 TLC薄板 胶头滴管等。 参考文献： [1]谭天伟. 生物分离技术.北京：化学工业出版社.，2007.7 [2]蒋本国，王艳颖，李春斌，刘秋.生物化学实验.大连民族学院。2010.7 [3]刘宝全. 生化分离工程基础实验技术.辽宁大学出版社.2014.11 [4]刘国诠，生物工程下游技术，北京：化学工业出版社，2003。 [5]陈来同，生物化学产品制备技术，北京：科学技术文献出版社，2004。 实验操作 操作步骤： 称取2g 红辣椒干粉放入滤纸包中。 向平底烧瓶内加入120ml丙酮，把滤纸包放入索氏提取器中，连接装置，开始提取。（80℃水浴锅加热）。 将提取好的粗提取液进行旋转蒸发。（注：旋转蒸发结束时，要先通大气，后关真空泵，防止泵内的水倒吸入旋转蒸发装置中。） 将得到的浓缩液先进行TLC层析，将配好的V石油醚：V丙酮=10:1的展开剂取0.8ml加入带盖广口瓶内，然后将点样后的TLC薄板放入瓶内开始薄层层析。 在柱内加入少量展开剂，并塞入一小团脱脂棉，防止硅胶渗漏。用V展开剂：V硅胶=2:1混匀装柱，装柱过程不可中断以免硅胶分层。注意层析柱内硅胶表面保持水平，层析柱保持竖直，硅胶内不可有气泡。 加入辣椒色素粗提取浓缩液，尽量不要沾到管壁。（比例为V石油醚：V丙酮=100:1） 操作流程图： 实验一：  实验记录 操作步骤： 操作说明及结果记录： 取红辣椒干粉 2g ↓ 用丙酮100mL，80℃索式提取 ↓ 浸提液减压蒸馏（40℃) 同时配置展开剂 V石油醚：V丙酮=10:1 ↓ 浓缩液用少量有机溶剂溶解待用 ↙↓ 纸层析点样,跑样↓ 取8mL 硅胶和20ml 展开剂混匀装柱 ↓ 将浓缩液上样，跑样 ↓ 分别收集洗脱得到色素 ↓ 纸层析点样,跑样 实验记录： 取红辣椒干粉质量m=2.0054g 丙酮体积120ml 开始加热时间为2:05,结束时间为3:45，历时1小时40分，水浴温度80℃ 回流次数 1 2 3 4 时间 3:00 3:15 3:31 3:42 颜色 深橘红色 橘红色 桔黄色 黄色 2、索氏提取浸提液的理化特征： (1)第一次回流液为深橘红色 （2）第二、三、第四次回流液颜色逐渐减淡 （3）第四次回流后，粗提液呈深橘红色，清澈透明，颜色鲜艳 3、粗提液经旋转蒸发浓缩后，圆底烧瓶内壁上附有一层粘稠的红色油状液体体，光亮透明。 样品的柱层析 （1）柱层析所用样品的体积：0.3ml （2）样品经层析柱分离后产生三个色带，从上到下分别是： 橙黄色 红色 黄色， （3）其中黄色色带最长然后是橙黄色，最后为深红色。 5、TLC层析 （1）用毛细管吸取样品点在薄板上 （2）放在展开剂中进行跑样 （3）完成层析取出薄板。 实验结果与分析 提取结果分析 （1）辣椒红色素的粗提取： 辣椒红色素是天然红色素的一种，可从成熟的茄科红辣尖椒(Capsicum annum1)中提取。辣椒果皮含有0．2％～0．5％的胡萝卜色烯类色素，其中辣椒红素和辣椒玉红素占总量的50％ ～60％。其易溶于极性较大的有机溶剂，几乎不溶于水。本实验中采用丙酮作为提取溶剂，采用索氏提取法常压回流提取。粗体产物为透明红色液体。 （2）旋转蒸发： 通过电子控制，使烧瓶在最适合速度下，恒速旋转以增大蒸发面积。通过真空泵使蒸发烧瓶处于负压状态。蒸发烧瓶在旋转同时置于水浴锅中恒温加热，瓶内溶液在负压下在旋转烧瓶内进行加热扩散蒸发。用加热浴加热蒸馏瓶中的溶剂，加热温度可接近该溶剂的沸点；同时还可进行旋转，溶剂形成薄膜，增大蒸发面积。此外，在高效冷却器作用下，可将热蒸气迅速液化，加快蒸发速率。 （3）TLC层析： 将样品溶液用毛细管点在薄层板的一端，置密闭槽中，加入适宜溶剂为流动相。由于毛细管原理，溶剂被吸上，沿板移动，并带动样品中各组分向前移动展开。由于各组分性质不同，移动距离不同，展开一定距离后，即得互相分离的组分斑点。①最上层橙黄色色带中主要应为辣椒红素 辣椒红素是一种辣椒中的提取物，属于类胡萝卜素的一种。 ②中间深红色的条带为辣椒玉红素 分子式为： ③最下层黄色条带为玉米黄质： 分子量：56