华支睾吸虫诊断原基因的筛选、克隆和生物信息学分析.pdfVIP

华支睾吸虫诊断抗原基因的筛选、克隆和生物信息学分析 中文摘要 【目的】 用阳性血清筛选华支睾吸虫成虫cDNA表达文库，以其筛选到新的序列，研究其功 能，希望成为新的诊断抗原基因为华支睾吸虫的诊断制剂的研发、抗华支睾吸虫病药物 的新靶药点的发现甚至为候选疫苗的研制提供重要的研究基础。 【方法】 1．华支睾吸虫成虫cDNA文库的免疫学筛选： 免疫筛选血清的收集；抗血清预吸收；宿主菌的制备；cDNA文库的免疫学筛选； 定位并挑取其中的2个阳性克隆。 2．2个新序列的扩增、测序和克隆： 并转化；质粒的提取和双酶切；测序；设计引物、2个新序列的PCR、克隆与质粒的提 取、酶切；新基因序列的片段与表达载体的连接和转化。 3．对筛选到的新序列进行生物信息学分析： 使用DNA 酸组成、蛋白质相对分子质量、理论等电点等：使用在线HNN软件进行二级结构的分 析，包括仪．螺旋、p一转角、无规卷曲等；使用EXpasy软件对拓扑结构和跨膜螺旋的预 程序进行特定位点分析；使用Si印aP软件进行信号肽序列分析；使用mDBAnalysis Recource在线分析工具进行抗原表位和亲水性分析；使用印sbl硒t对结构域分析等等。 【结果】 对华支睾吸虫成虫cDNA文库进行