鸭瘟病毒UL41基因原核表达、转录时相及其亚细胞定位.pdfVIP

四川农业大学硕士论文 』II／llfllllIlllllll IIXJlUlrlUJ。 J0120741， 中文摘要 根据本实验室构建的鸭瘟病毒(DPV)CHv株基因文库及其测定的序列信息， 学分析，对UL41基因进行原核表达、蛋白纯化和抗体制备、转录时相分析以及 UL41蛋白的亚细胞定位研究，获得如下结果： 1．鸭瘟病毒UL41基因序列的分子特性分析 DPV 及磷酸化位点预测揭示UL41基因编码的蛋白既没有信号肽也没有跨膜区，片段有 24个潜在磷酸化位点。通过对该基因编码蛋白的二级结构预测分析发现无规则卷曲 和旺螺旋比例较大，三级结构预测发现与Flap GaHV-3进化关系最近。 2．UL41基因的克隆、原核表达、蛋白纯化及抗体制备 I和Xho pMDl9-T-UL41。通过EcoR (+)．UL41。菌液PCR、EcoRI和Xho I双酶切及测序鉴定重组表达质粒pET032a 受态细胞诱导表达。重组表达菌在IPTG的诱导下成功表达得到与预期大小相同的 76kDa 6xHis重组融合蛋白，此蛋白主要以包涵体形式存在。UL41蛋白最优表达条 件为30。C摇菌培养加入0．2mmol／L 检测说明其能被兔抗DPV阳性血清识别。重组UL41蛋白纯化后用于制各兔抗 明能特异识别表达的UL41重组蛋白。 3．DPV UL41基因转录时相 DPV感染宿主鸭胚成纤维细胞后，利用荧光定量PCR相对定量法检测UL41基 Green 因转录的情况，试验中利用SYBR I作为荧光染料检测不同时间段收取的细 胞样品。结果显示UL41基因6h开始出现转录，36h达到最高峰，54h仍有转录。 4．DPV UL41蛋白亚细胞定位 间接免疫荧光法检测UL41基因编码蛋白的亚细胞定位情况，结果UL41基因的 万方数据 四川农业大学硕士论文 编码蛋白定位于细胞质中。UL41蛋白表达时相动态结果是DPV感染后6h即能在细 胞观察到荧光，随着时间的延长荧光也增强，48h仍能检测到荧光。 关键词：鸭瘟病毒；分子特性；UL41基因；原核表达；亚细胞定位；转录时相； 万方数据 四JIi农业大学硕士论文 ABSTRACT phaseanalysis Cloning，prokaryoticexpression，transcription ofDuck virusUL41 andsubcellularlocalization gene plague Xuelian Medicine) Cao(PreventiveVeterinary and DirectedProf．Anchun by ChengProf．MingshuWang 1 totheduck virusCHvstrai