多药耐药相关蛋(mrps)基因家族在儿童急性淋巴细胞白血病中的表达模式及其临床意义.pdfVIP

2 多药耐药相关蛋白 （MRPs ）基因家族在儿童急性淋巴细胞白血病中的表达模式及其临床意义 中文摘要 多药耐药相关蛋白 （MRPs ）基因家族在儿童急性淋巴细 胞白血病中的表达模式及其临床意义 中文摘要 本论文包括三个部分：（一）多药耐药相关蛋白 （MRPs ）基因家族 6 个家族成 员 （MRP1-6 ）基因荧光定量 RT-PCR 的优化；（二）儿童急性淋巴细胞白血病 MRP1 的表达及意义；（三）儿童急性淋巴细胞性白血病 MRP2-6 的表达及意义。 第一部分 多药耐药相关蛋白 （MRPs ）基因家族荧光定量 RT-PCR 的优化 目的：通过定量 PCR 技术检测 MRP1-6 基因 mRNA 在白血病细胞株中的表达水 平，优化荧光定量 RT-PCR 的条件，鉴定引物的特异性，为研究 MRP1-6 基因在儿童 急性淋巴细胞性细胞白血病 （acute lymphoblastic leukemia, ALL ）中的表达及意义提 供基础。 方法：培养和收集 3 株白血病细胞株为模板，提取总 RNA ，逆转录合成 cDNA ， 优化实时定量 RT-PCR 条件，通过测定 MRP1-6 基因在各个细胞株中的表达水平和溶 解曲线分析，鉴定 MRP1-6 基因引物的特异性。 结果：MRP1-6 基因引物具有特异性，通过优化荧光定量 RT-PCR 条件为研究 MRPs 在儿童 ALL 中的表达奠定了基础。 关键词：多药耐药相关蛋白基因家族 （MRPs 基因）；引物；荧光定量 RT-PCR （qRT-PCR ）；白血病细胞株。 I 中文摘要 多药耐药相关蛋白 （MRPs ）基因家族在儿童急性淋巴细胞白血病中的表达模式及其临床意义 第二部分 儿童急性淋巴细胞白血病MRP1 基因的表达及临床意义 目的：多药耐药相关蛋白基因 （multidrug resistance associated protein-1，MRP1 ） 在多种肿瘤中高表达，与肿瘤多药耐药具有密切相关性。通过定量 PCR 检测儿童急 性淋巴细胞细胞白血病 （acute lymphoblastic leukemia，ALL ）MRP1 基因 mRNA 的 表达水平，分析其在儿童 ALL 中的表达特点及临床意义。 方法：收集 2013 年期间在苏州大学附属儿童医院诊断和治疗的 ALL 患儿 146 例 （初诊 67 例，完全缓解 70 例，复发 9 例），10 例特发性血小板减少性紫癜（idiopathic thrombocytopenic purpura ，ITP ）患儿骨髓为对照。应用定量 RT-PCR 方法检测 MRP1 基因的表达水平，利用 SPSS 18 统计学软件，分析 MRP1 基因表达水平与儿童 ALL 临床预后指标的相关性。 结果： 1 初诊组和复发组 MRP1 的中位表达水平分别为5.82 和 8.49，明显高于完 全缓解组 （1.99），P 值均＜0.05；其中复发组表达水平最高。 2 MRP1 的表达水平与 ALL 危险程度具有密切相关性，低危组表达水平最低、中危组居中、高危组最高，中位 数依次为 4.28、5.62 和 7.56，中危组与标危组、高危组与标危组之间的差异具有统计学 意义，P 值分别为 0.015、0.007 。 3 以中位表达水平为界将初诊患儿分为高、低表达量 两组，高表达组 （n 34 例）第 7 天强的松预处理敏感率为 70.6%，而低表达组 （n 33 例）敏感率为 90.9%，P 0.035 ；第 33 天骨髓完全缓解率高表达组为 64.7%，低表达组 为 87.9%，P 0.026 ；第 15 天骨髓完全缓解率高表达组为 68.8%，低表达组为 69.7%， P 0.664 。（4 ）初诊 T-ALL 组 （n 10 例）MRP1 的表达水平高于B-ALL 组 （n 57 例）， 中位数分别为7.71 和 5.18，差异有统计学意义 （P 0.007 ）。（5）单因素分析显示 MRP1 mRNA 表达水平与患儿性别、年龄、初诊时白细胞计数、血红蛋白、血小板计数、外周 血涂片幼稚细胞比例及骨髓涂片幼稚细胞比例无相关性。 结论：在儿童急性淋巴细胞性白血病中，MRP1 的表达与免疫分型、治疗反应、 危险程度及疾病复发密切相关，是 ALL 预后差的有效指标。 关键词：儿童；急性淋巴细胞白血病；MRP1 基因；定量 RT-PCR ；治疗反应 II 多药耐药相关蛋白 （MRPs ）基因家族在儿童急性淋巴细胞白血病中的表达模式及其临床意义 中文摘要 第三部分 儿童急性淋巴细胞白血病MRP2-6 的表达及临床意义 目的：MRP2-6 基因在多种肿瘤中高表