富h2溶液对细及造血系统的辐射防护效应研究.pdf

富H 溶液对细胞及造血系统的辐射防护效应研究 2 摘 要 随着原子能在国防、工业、农业、医疗、科技等国民经济各领域的普及应用，核 能在巨大造福人类的同时，也给当今世界带来严重的核辐射危险，给人类的健康与安 全带来了严峻的挑战。核武器的出现和使用给现代战争带来了更大的威胁，拥有核武 器国家的增加及核武器的加速扩散增加了爆发局部战争的危险。我国也是核大国，拥 有核武器、核潜艇等战略核力量，还有大量的核电站，因而核辐射防护在保障从业人 员身体健康中具有重要的特殊地位，它在未来核战争、平时反核恐怖袭击，以及核电 站事故应急救援中也具有重要的战略意义，加强核辐射损伤防护研究任重道远。现代 生物医学的不断发展，放射治疗已经成为恶性肿瘤以及一些良性疾病的重要治疗手 段，可是辐射对正常组织的损伤，限制了放疗的发展。降低辐射所造成正常组织细胞 的损伤，给放射防护学家提出了新课题。探索高效、低毒的辐射防护剂始终是国内外 放射防护研究的重点和难点。 电离辐射对生物体构成的损伤，主要来自直接作用和间接作用，其中间接作用引 起的损伤占辐射损伤的 70%-80%左右，因此辐射防护剂的研究重点在于缓解或者清 除辐射所产生的大量自由基，提高机体的抗放能力，从而保护机体组织和器官免受伤 害。 2007 年，Ohsawa 等人发现氢气可以选择性减少细胞毒性氧自由基，发挥治疗性 抗氧化作用。从此，在世界范围内掀起了研究氢气的热潮，也正是氢气能够选择性减 少羟自由基引起了我们辐射防护研究者的兴趣，因为在辐射损伤中大部分损伤是有羟 自由基所导致。因此，我们推测其具有很好的辐射防护效果。 H2 以前又被误认为生理性惰性气体，因为研究者认为其不会与体内的任何物质 发生反应，而且人的肠道细菌不断的产生氢气并在血液中循环。因此，低浓度的氢气 对人体是无毒副作用的。从而，它具有很好的应用前景。氢气是易燃气体，具有一定 的危险性，将其溶于各种溶剂中再予以使用则解决了这个问题，并可使用于临床。 而目前在国际上并无报道将氢气用于辐射防护，电离辐射可以造成机体多种系统 器官损伤，尤其对由增殖更新迅速的细胞构成的组织造成的损伤更为严重，如造血系 统就是机体高辐射敏感组织之一。电离辐射不仅可以对造血干细胞、造血祖细胞引起 抑制和破坏，也能引起骨髓血窦的损伤。在这一领域国际上存在着很大的空白，对于 此方面的研究将填补这项空白，具有很大的研究价值。 研究内容： 1.富H2 溶液的制备：采用特种装置将氢气通入生理盐水、PBS 、或培养基等溶液， - 1 - 第二军医大学硕士论文 再通过加压仓对其高压（0.4MPa ）加压 6 个小时。摸索出较好的合成方案和技术方 法。 2.富H2 溶液对细胞的辐射防护效应：选取淋巴母细胞（AHH-1 细胞）作为研究 细胞，做出细胞在不同照射剂量下的剂量存活曲线，分别观察：①不同浓度的富 H2 溶液对相同γ 射线照射剂量照射后细胞的防护作用。②相同浓度的富H2 溶液对不同 照射剂量细胞的防护作用。③相同浓度的富H2 溶液不同时间给药对AHH-1 细胞存活 率的影响。④富H2 溶液对照后细胞乳酸脱氢酶露出率影响（LDH ）。 3.富H2 溶液对小鼠造血系统的辐射防护效应：①富H2 溶液对γ 射线照后外周血 白细胞（WBC ）的影响②富H2 溶液对γ 射线照后骨髓有核细胞计数的影响③定量分 析富H2 溶液对γ 射线照后小鼠内源性脾结节计数的影响④分析富H2 溶液对γ 射线照 后小鼠CFU-GM 的影响④富H2 溶液对照后血液抗氧化酶SOD、GSH 的影响。⑤富 H2 溶液对照后血液脂质氧化产物MDA 的影响。 4.初步探讨富 H2 溶液的辐射防护效应机制：分析该富H2 溶液对照后细胞DNA 影响，8-OHdG 浓度影响等。 实验方法： 1.富 H2 溶液的制备：参考国内外有关文献，用本实验室已摸索出的平台，优化 制备方法，制备富H2 溶液。 2.细胞培养：AHH-1 细胞为来源于人淋巴母细胞系的建株细胞（本实验室长期培 养）。细胞培养条件：RMPI-1640 培养基（Hyclone 公司），10%NCS