用彗星试验检测土壤污染对蚯蚓活体基因损伤_陈颖.pdfVIP

第 42 卷 第 4 期 土 　壤 　学 　报 Vol42 ,No4 2005 年 7 月 ACTA PEDOLOGICA SINICA 　July ,2005 用彗星试验检测土壤污染对蚯蚓活体基因损伤 陈　颖 　王子健 ( 中国科学院生态环境研究中心 ,环境水质学国家重点实验室 ,北京 　100085) 摘 　要 　　彗星试验 ,又称单细胞凝胶电泳 ,因其能够在单细胞水平上灵敏地检验 DNA 链断裂 ,成为研 究遗传毒性效应的新技术 ,近年来得到重要应用 。比较而言 ,如何利用该技术来检验土壤无脊椎动物活体基 ( ) 因损伤的报道则很少 。本研究以丝裂霉素 C Mitomycin C 为遗传毒性阳性物质 ,研究了用彗星试验检验赤子 ( ) 爱胜蚓 Eiseniaf oetida 活体基因损伤的实验方法 ,对尾长 、“彗尾”DNA 含量和尾矩三个指标定量表达实验结 果的敏感性进行讨论 ,并以污水灌溉土壤样品为例研究了污染土壤导致的蚯蚓体内DNA 单链断裂 。结果表 明 ,采用彗星试验检测蚯蚓体内DNA 单链断裂的基因损伤效应可以作为生物效应标志终点 ,尾矩和尾长作为 敏感指标可以更好地表达遗传毒性物质基因损伤的剂量效应关系 。 关键词 　　彗星试验 ;基因毒性 ;蚯蚓 ;土壤污染 中图分类号 　　X171. 5 ;X131. 3 　　　　　文献标识码 　　A [3 ] ( ) 　　多年研究表明 ,具有“三致”效应物质的基因损 值 。Olive 等 　提出尾矩 Tail moment , TM 的概念 , 伤作用之一是能够破坏生物体 内DNA 分子的整体 尾矩是由尾长和“彗尾”DNA 含量的相乘得到 。在 结构 ,引起基因缺失或改变从而导致细胞发生突变 , 高剂量损伤下 ,尾矩与损伤程度仍保持较好的线性 因此 DNA 断裂水平的检验成为研究遗传毒性效应 关系 ,故该参数能较满意地用于多种情况 。赤子爱 ( ) ( ) 的重要标志物 。彗星试验 又称单细胞凝胶电泳 技 胜蚓 Eisenia f oetida 是 目前研究化合物慢性和急性 术 ,因其能够在单细胞水平上敏感地检测 DNA 链断 毒性的标准土壤无脊椎动物 , 已被广泛用于土壤环 裂 ,提供了一种有效检测遗传毒性物质的重要方法 , 境污染物的毒性效应研究 。但以蚯蚓体内遗传毒性 近来在环境毒理学领域得到广泛应用[ 1 ,2 ] 。其实验 效应作为生物标志效应的相关研究很少 ,应用彗星 原理可简单描述为 :在强碱溶液的作用下 ,包埋于琼 试验来研究蚯蚓活体暴露基因损伤的研究则更不多 脂糖中的细胞膜 、核膜及其他膜结构受到破坏 ,膜内 见[4 ] 。 的蛋白质 、RNA 及其他成分进入凝胶而扩散至电解 本工作以丝裂霉素 C (Mitomycin C ,MMC) [5 ] 为 液中 ,而核 DNA 分子量很高 ,不能进入凝胶 ,只能留 遗传毒性阳性物质 ,研究了用彗星试验检验赤子爱 于原位