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乙肝HBsAg 和HBsAb 双阳患者S 区基因突变对HBsAg 抗原性的影响 中文摘要 乙肝HBsAg 和HBsAb 双阳患者S 区基因突变对HBsAg 抗原性的影响 中文摘要 目的：构建乙肝HBsAg 和HBsAb 双阳患者S 区突变株的HBsAg 表达系统， 探讨S 区基因突变对HBsAg 抗原性的影响。 方法：1、从HBsAg 和HBsAb 同时阳性乙肝患者血清中提取HBV DNA，PCR 后对其S 基因区进行检测分析突变情况，同时确定基因型；将S 区基因进行克隆， 克隆成功后选取阳性克隆并进行测序，进一步分析克隆株的突变情况。2 、构建 乙肝双阳患者S 区突变株的重组表达载体，在原核宿主细胞 （大肠杆菌）及真核 宿主细胞 （CHO 细胞）中表达HBsAg ，分别获取目的蛋白。3、定量检测突变的 HBsAg 的含量，并将突变的HBsAg 进行western blot ，观察突变HBsAg 与抗体 的反应性。 结果：克隆测序结果显示双阳患者 S 区基因发生突变，基因型 C 克隆株的 氨基酸突变位点大多发生于194、68、3 及126 位点；基因型B 的突变大多发生 于40 、200 、129 及5 位；a 决定簇内氨基酸突变次数越多的患者，HBsAg 的定 量值越低；化学发光法定量测定突变株表达的HBsAg ，发现发生 126 位点突变 的克隆株其表达的 HBsAg 含量低于无 126 位点突变的克隆株；而 western blot 结果显示所有克隆株表达的HBsAg 与单克隆抗体反应均有条带显示。 结论：双阳患者S 基因区a 决定簇存在较多突变尤其是在第一环；通过原核 及真核表达的S 区基因突变的HBsAg 都能与抗体发生反应，具有抗原性；S 基 因区a 决定簇126 位点突变可能改变了HBsAg 的空间构象，导致其抗原性改变， 影响HBsAb 与突变的HBsAg 的结合，从而使HBsAg 定量结果降低。 关键词：乙肝表面抗原；突变株；表达；抗原 作 者：王珊 指导老师：王蕾 教授 I Abstract 乙肝HBsAg 和HBsAb 双阳患者S 区基因突变对HBsAg 抗原性的影响 Influence of S gene mutation on antigencity of HBsAg in patients with HBsAg+/HBsAb+double positive result Abstract Objective: To construct the expressing system of HBsAg with S gene mutation and to study the influence of S gene mutation on antigencity of HBsAg. Method: 1. HBV DNA samples extracted from patients sera were assayed with PCR detection technique.then analyse the mutations of S gene region and to indentify genotype. The cloning plasmid was constructed, and the positive clones were sequenced and analysed. 2. To construct recombinant expressing plasmid and express the HBsAg with S gene mutation in pro