中华鳖“浮肿病病原菌的鉴定及迟钝爱德华氏菌溶血活化基因的克隆.pdf

中华鳖“浮肿病”病原菌的鉴定及迟钝爱德华氏菌 溶血活化基因的克隆 摘要 从患浮肿病的中华鳖中分离到三株细菌：分别命名为1号菌、2号菌和3 号菌。经形态及生理生化鉴定，1号菌为肺炎克雷伯氏菌，2号菌为温和气 单胞菌或者嗜水气单胞菌，3号菌为迟钝爱德华氏菌。 对三株菌的16SrDNA序列进行了扩增、克隆、测序和序列分析。序列分 析结果显示，1号菌和肺炎克雷伯氏菌血清型亲缘关系最近：2号菌和嗜水 气单胞菌的亲缘关系最近：3号菌和迟钝爱德华氏菌最近。综合考虑形态及 生理生化特征和16SrDNA序列分析结果，可以判定，1号菌是肺炎克雷伯氏 菌，2号菌是嗜水气单胞菌：3号菌是迟钝爱德华氏菌。 后肢肌肉注射感染实验表明，1号菌与2号菌在本试验中没有造成中华 鳖的死亡，不是致病菌，3号菌对其有很强的致病性。 药敏实验中，发现三株菌的药物敏感性有较大差别。1号菌对氯林可霉 素、丙氟哌酸不敏感。2号菌对青霉素、四环素、痢特灵、林可霉素不敏感。 3号菌对青霉素、万古霉素、氨苄青霉素、苯唑青霉素不敏感。 应用PCR扩增，从迟钝爱德华氏菌染色体DNA扩出爱德华氏菌溶血活化 基因，DNA序列分析表明：克隆的片断由599个碱基组成。与高大庆等人分离 的eha同源性为100％。 本研究通过对水生动物细菌疾病的快速诊断以及爱德华氏菌溶血活化 基因的研究，为今后爱德华氏菌的研究打下了基础。 16SrDNA， 关键词：中华鳖， 病原菌， 鉴定， 迟钝爱德华氏菌， 溶血 活化基因 THEIDENTIFlCATl0NOFBACTERIALPATHOGENOF SINENSISANDTHE OFHERMOLYSlN TRIONYX CLONE I ACTI VATORGENEOFEDWARDSELLATARDA ABSTRACT named Threestrains wereisolatedfromdiseased No．1，No，2，No．3 Trionyx wereidemified and characteristicsthe sinensis．After biochemical they bymorphological resultturnsouttobethatNO．1is is or K．peneumoniae．NO．2 isEdwardsiella Aeromonassobria．NO．3 tarda． The16S—rDNAofthreestrainsale andthen genes resultshowsNO．1isclosesttO isclosestto aligned．The K．peneumoniae，NO．2 alignment is closesttoEdwardsiella theresultsof Aeromonashydroph