一个新的肿瘤基治疗载体的探索——婴儿双歧杆菌对小鼠黑色素瘤模型肿瘤组织的靶向性.pdf

翦 言 日U 舌 肿瘤簸因治疗从基础淹向临床，从体内走向体外，取得了许 多有益静成莱，懿麸穗寐试验效采看，体内基因转移仍蠢许多阉 题有待解决，目前最缺芝的是具巍肿瘤特异性的旗因转移载体系 统lIj’载体的改进仍是未来基因治疗研究中的关键领域[1-21。目前 爨采用的黢传有瘸毒(如逆转录痰毒、艨病毒、腺相关痰毒等) 和非病毒(如脂质体、裸DNA等)两类，其中以病毒载体应用墩 必广泛。这嚣类载薅都存在靶巍瞧不强、量爨转暴豹治疗基因在 体内表达水平不够理想的缺点，在改造这两类载体的同时，也应 寻找薪羹豹离髀瘸靶鑫毪、意器鹩基因表这率静载俸。 癌症死亡者中，死于实体瘤的约占90％以上，主要梦E因是来 源于肺、瑰腺、缩肠和前硝腺等的上皮源性蔼串癌。这些实体性肿 瘸的体积增长受到一定的限制，农达到直径200um-300um前能顺 利增长，此后由于体积的增大，处于肿瘤球体中心的细胞变得缺 factor一1，低氧诱导因子，血管内皮生长因子VEGF的转蒙因子)以 及VEGF等餐搜蠡篝囱瘗傣瘫增戆，绘耱瘸提供营葬纛氧，蛰豫试 肿瘤的生长。这热新生血管生长迅速，但对于大多数快速生长的 耱癯来说，新生豹盘营仍不链有效遣提供足够静营养窝瓴，绕瓶 管肿瘤细胞的快遗增殖，不断把～些细胞推出100um一150um的 裁有效弥散范国以外，使这些细胞缺氧，并最终发生坏死Ⅷ。这种 凌实体瘥中掌见的黪瘦姣氧现象提供了萎孛瘩基因浚疗戆凝思路， 即：利用累有趋低氧特性的厌氧麓作为肿瘤基因治疗的载体。 前 言 到目前为止，已研究过的厌氧菌主要为梭状薜胞杆菌和双歧 枰麓两大蔼属，并发现体为基因载体此=者其有以下优患：安全 慢较高M41；具有商度的肿瘤靶向性酗4l；在瘤组织内具肖繁殖能 力，且可商效表遮外源基因{10，15’；本身亦具有抑瘸效应[5-7,131。已 deaminase，CD) 考国外研究者将大肠援菌藏囔睫脱氨酶(cytosine 基因和肿瘸坏死因子(mTNF一Ⅱ)旗因分别克隆入拜氏梭状芽胞秆 蘩(Clostridium sporogenes)}2。2珏，将箕无活往燕子经静踩给予菊瘸鬣，获褥了较静 的抑瘤效廒及厌氧菌在肿瘸内的较高繁殖率。Nuyts【2ll并发现如果 用放射诱导的启动子来控制这两种基因的表达，羽蛋自裘这的调 控更加理想。Dang[22]则擞去除了诺维氏梭状芽胞抒萤(e．novji) 的致死毒性基因厢，以同样方式静脉给予荷瘤鼠萁孢子，随后给 予传绞纯疗药物，24，l、簿嚣帮出瑗明显摭癌效应。 对双歧杆菌的研究则仅限于长双蛾杆菌(Bifidobacterium longum)。Yazama等口3猫眩实长双竣耪莹瓣黑色豢癌、Lewis蒡搴瘗 等胸部肿瘤均具有良好的实体瘸靶向饿和肿瘸内生长能力； Fujimori簿勰剐剿用长双坡秆菌获得了商求乎前俸药物激活的安 验结果。撩于对双歧菌属的研究较少，以及曾有人报道的梭状菌属 与真菌混☆感染导致幅床菌血症，我们选取双竣杆菌作为研究对 象，蓑望驻寻找一秘副终鼷小，羰鲍基霞表达率糍的厌袋越载体。 2 材料与方法 材料与方法 一．材料 1实验仪器 低温离心机 ··Heraeas Germany BLll0S电子天平 ···Sartorius Germany 超低滠数艇～………………………一Sanyo HTS7000 plus多孔板(紫外／荧光／可见光)高效分析仪 PE USA corporati