一.伤寒杆菌质prlt;,st98gt;毒力基因spv的研究;二.乙型肝炎病毒hbx蛋白重组腺病毒载体的构建.pdf

第一部分伤寒杆菌质粒pRm。毒力基因sot／的研究 目的：证实伤寒杆菌耐药质粒pRsT98是否含有其他沙门菌质粒毒力基因 spy的同源序列，并分析pRst。s毒力基因与鼠伤寒沙门菌质粒毒力基因的 同源性，为阐明耐药伤寒杆菌致病机制提供依据。 为聚合酶链反应(PCR)的模板，反应扩增得到的阳性片段spvR和spvB Q进行扩增。 分别与克隆质粒载体pGEM．T连接，转化宿主菌E．coliDH5 经限制性内切酶鉴定含重组质粒的阳性克隆后，分别进行核酸序列测定， 并进行生物信息学分析。 结果：spvR和spvB核酸序列测定结果显示，两者的开放读码框架(ORF) 鼠伤寒沙门菌质粒毒力基因的spvR有99％N]源性；spvB核酸序列与鼠 伤寒沙门菌毒力基因的spvB则完全相同。根据测得的核酸序列预测其编 蛋白结构域；spvB具有sal·spvB／VIP2蛋白结构域。 结论：伤寒杆菌质粒pRsr98除编码细菌抗药性外，还含有与细菌毒力相 关的基因，提示质粒pRsT98是一种既编码细菌抗药性又增强细菌毒力的 具有双重功能的“嵌合型”质粒。本研究为进一步了解耐药伤寒杆菌致 病作用的分子机制提供了依据。 关键词：伤寒沙I-1菌；耐药质粒：毒力基因：聚合酶链反应；核酸测序： 生物信息学 第二部分 乙型肝炎病毒HBx蛋白重组腺病毒 载体的构建 目的：构建可表达I-IBx蛋白的重组腺病毒载体，为研究HBx与肝癌发 生的关系提供有效的手段。 方法：首先采用限制性核酸内切酶从真核表达载体质粒pCDNA3．1一HBx 得到HBx基因；将HBx基因与穿梭质粒连接，得到含目的基因的重组穿 梭质粒；经线性化后和腺病毒骨架质粒共转化原核细胞，通过同源重组 得到重组腺病毒质粒载体；经线性化后由脂质体介导转染真核细胞，可 得到含有HBx基因、能表达HBx蛋白的重组病毒。并对重组病毒进行病 毒滴度测定。 结果：本研究得到的重组腺病毒载体pAdHBx经转染真核细胞，能组装 并释放完整的、具感染性的、可表达HBx蛋白的重组腺病毒。以荧光计 efu／ml。 数法测得重组腺病毒滴度为2×】012 结论：成功构建了重组腺病毒质粒载体，经脂质体转染真核细胞，产生 可表达HBx蛋白的完整病毒，可应用于HBX在肝细胞肝癌发生中机制 的研究，并有望应用于肝癌基因治疗的研究。 关键词：乙型肝炎病毒；HBx基因；腺病毒载体 作 者：焦呖 指导教师：黄瑞 lI 英文摘要 Abstraet GeneOilthe theVirulence PartI ON Study spy Plasmid Salmonella resistant typhi pRsT98 Multidrug isto andmolecularof research analyzeplasmid Objective：This identify in