中华绒螯蟹血清集素生物学特性的研究.pdf

摘要 sinenMs，俗名河蟹)的免疫机制，探 为了研究中华绒螯蟹(Eriocheir 索提高其防御能力，提供在生产实践中有效地防治河蟹疾病的科学依据， 本研究用微量凝集试验、正交试验设计、(SDS一)聚丙烯酰胺凝胶电泳、免 疫酶斑点技术等方法研究了河蟹血清凝集索的生物学特性。 微量凝集反应的结果表明，河蟹血清凝集素与部分动物红细胞(鼠、 鸡、兔、鸽、人A、B、O型)和某些细菌(嗜水气单胞菌J一1株、八叠球 菌)能发生不同程度的凝集作用，并且与鼠红细胞和与八叠球菌的凝集效 价明显高于与其他动物的红细胞或细菌的凝集效价(PO．叫)；与鲫鱼、鳖 的红细胞以及大肠杆菌、短小杆菌、金黄色葡萄球菌、拟态弧菌H一7株、 假单胞菌1．2株等细菌不发生凝集。来源于不同河蟹个体的血清凝集素对同 种动物红细胞或细菌的凝集效价表现出较大的变化范围；不同性别河蟹的 血清凝集素具有相同的凝集谱并且在凝集活性方面没有显著差异(PO．05)。 在与鼠红细胞的凝集反应中，河蟹血清凝集活性不受O．01mol／LCaCl2 NaCt降低；在0．1N0．4mol／L 和0，3mol／LNaCI的影响，但是可被O．6mol／L EDTA(pH5．0)条件下，其血凝活性被完全抑制。 本研究还设计了河蟹体重、水温、细菌浓度等三因素三水平的正交试 验，研究三种因素对河蟹血清凝集素产生的影响作用。结果表明，水温和 体重不是重要的影响因素(P005)：注射不同浓度的细菌能够显著影响凝 集素的产生(P0．05)，在注射细菌1—2天后凝集价可达到峰值，随后下降， 在12～14天接近列照水平。此外，用细菌3次注射河蟹(间隔5～7天／次) 可以刺激血清凝集素的凝集价的升高，但是增长效果不明显(P0．05)。 首次用鼠红细胞膜作为介质吸附河蟹血清中的凝集活性分子，经解脱、 复性，提取了凝集分子，建立了以鼠红细胞膜吸附、提取凝集素的方法。 提取的凝集素经过SDS．PAGE可获得3条蛋白带，其分子量分别为120100、 117300、114600。 用吸附提取的凝集素免疫小鼠，分离鼠抗血清，以凝集素的血凝抑制 试验和免疫酶斑点法通过检测该血清中抗凝集索的抗体效价，检验凝集素 的免疫原性，结果表明，河蟹血清凝集素具有较好的免疫原性。 关键词：中华绒螫蟹；血清凝集素；生物学特性：凝集分子 Studieson oftheLectininSerumof BiologicalProperties EriocheirSinensis Abstract of Methods microagglutinationassay,orthogonalexpetimemaldesign， in wereusedfor characterizationoflectin biological SDS·PAGE，dot-ELISA serl,uTlofriver sinensis． crab，Eriocheir A wascarriedoutonserumlectin ofcrab． microagglutinationassay activity Theresultsofshowedtllattheserumcould ofchicken． erythrocytes agglutinate