人β-ngf基在大肠杆菌与仓鼠卵巢细胞中的表达.pdf

厶曼：丝鱼￡基固查盔题枉苴皇鱼鼠鲤基塑盥主鲍塞蓝 主塞翅垂一 人B．NGF基因在大肠杆菌与 仓鼠卵巢细胞中的表达 神经生长因子(Nerve growth 养因子之一，在神经、免疫、造血、生殖及内分泌等系统均有重要生 物学作用，尤其在神经系统中的作用已被公认。NGF对调节神经元 的生长、发育、分化、存活及神经损伤的再生修复均具有重要作用， 在Alzheimer’s病、脊髓损伤和外周神经病变等疑难性神经系统疾病 中已证实有较好治疗效果。天然NGF可从表达丰富的人组织中直接 提取，但操作中存在诸多问题，远不能满足临床用药的需要，且因为 NGF是大分子蛋白，不易透过m脑屏障，故治疗受到限制。NGF分 子的B链是具有NGF活性的小分子片段，能穿过血脑屏障。为了能 寻求一种切实可行及表达高活性小分子NGF的生产途径，我们通过 基因工程和细胞工程技术设计了两种NGF的体外重组方案。 的构建及其在大肠杆菌中的表达 摘要：目的为B—NGF的基因制药选择一种新方法。方法设 计一对特异引物，直接从人血细胞基因组DNA中PCR扩增出NGF 基因片段，先克隆至PUC．T载体中，经过酶切获得NGF片段后再定 化大肠杆菌DH5 Q，并将筛选的阳性克隆通过42。C诱导表达。结果 厶壁型鱼呈基固查左堕j王萤墨盒鼠鲤基绝窿主敛麦生 一———生塞擅要一 经限制酶酶切电泳和DNA测序证实，确为B—NGF全长序列(约 菌体总蛋白量20．7％。结论成功克隆B-NGF基因全长序列并在大 肠杆菌中获稳定表达，其生物学活性有待于进一步研究。 关键词：人基因组DNA；神经生长因子；大肠杆菌；基因表达 的高效表达及其纯化 摘要： 目的检测人B．NGF基因转染CHO细胞后培养上清中所 表达的13-NGF的生物学活性及分离纯化。方法采用脂质体介导的 真核细胞转染，运用形态学观察和Mrr法进行检测做定性定量分析， 近自然合成的蛋白，纯化后的蛋白同样具有较高生物学活性，此法可 用于B．NGF基因制药。 关键词：人13．NGF；真核转染；基因表达 研究生：白艳艳 导师：缪竞诚教授 杨吉成教授 II 人13．NGF基因在大肠杆菌与仓鼠卵巢细胞中的表达 英文摘要 ofhuman 12 13-NGFinE．coli Expression gene DH5 andin mammliancells CH0 Abstract Nerve an factor growth to factor(NGF)is important neurotrophic immune system，hematogeneous