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人巨细胞病毒pUL38 激活mTORC1 的机制研究 中文摘要 中文摘要 人巨细胞病毒是β型疱疹病毒家族中的成员，能感染多种不同的细胞类型。 人巨细胞病毒的感染是导致新生儿出生缺陷的主要原因之一，此外它能在免疫缺 陷的人中引起严重的疾病。这种病毒一旦感染了宿主之后，就不能被宿主的免疫 系统彻底清除，之后它将以一种潜伏感染的形式终生存在，并且在宿主体内反复 感染发作。作为细胞专噬性病毒，人巨细胞病毒已经进化出了多种机制在宿主细 胞内创造一种有利于自身生存和复制的环境。 由于mTORC1 在调控细胞内蛋白合成及同化代谢等方面都起着非常重要的作 用，因此它常常成为病毒调控的作用靶标。许多病毒都已进化出了多种多样的机 制或通过直接作用于mTORC1 或间接作用于mTORC1 的上下游分子来激活细胞内 mTORC1 这条重要的信号通路。尽管人巨细胞病毒在感染之后会引起细胞内环境 的压力，但是它依然能维持高活性的mTORC1 水平。已有研究报道人巨细胞病毒 中的多功能蛋白pUL38 能通过结合并拮抗TSC2 来激活mTORC1 ，pUL38 也能抑 制在巨细胞病毒感染过程中由内质网压力所诱导的细胞凋亡。 本研究中我们揭示了pUL38 的N 端截短突变体pUL3825-331 在抑制细胞凋亡方 面具有完整的功能。然而有趣的是pUL3825-331 虽然失去了结合TSC2 的能力但它 却依然能够激活 mTORC1 ，尽管和全长的 pUL38 相比稍微弱了一点。表达 pHA-UL3825-331 的重组病毒产生病毒的能力和野生型病毒相比大约降低了 10 倍， 这表明pUL38 和TSC2 的相互作用在产生有效病毒方面的重要性。通过利用点突 变分析的方法我们确认了pUL38 中位于第23 和24 位的氨基酸基序TQ 对于其和 TSC2 的相互作用是极其重要的。更重要的是，当过表达突变体pHA-UL38 TQ/AA 时，它能够像pHA-UL3825-331 一样激活mTORC1 。通过利用CRISPR 基因编辑技 术我们构建了TSC2 敲除的U373-MG 单克隆细胞系，并且揭示了pUL38 在TSC2 敲除的细胞中能够更进一步地激活 mTORC1 。因此本研究确定了 pUL38 中对 pUL38 和TSC2 相互作用来说所重要的TQ 氨基酸基序，并且阐明了pUL38 能通 过TSC2 依赖和不依赖2 种方式激活mTORC1 。 关键词：人巨细胞病毒，pUL38 ，mTORC1 ，TSC2 作 者：白亚丹 指导老师：钱志康 刘海燕 I 英文摘要 人巨细胞病毒pUL38 激活mTORC1 的机制研究 A mechanistic study of human cytomegalovirus pUL38 activating mTORC1 Abstract Human cytomegalovirus (HCMV) is a member of the betaherpesvirus family with broad cell tropism. HCMV infection is a leading cause of birth defects and causes severe diseases in immunocompromised individuals. Following primary infection, HCMV is unable