人生长激素基因克隆及暂态表达.pdf

本文所用英文缩写词汇 Amp ampicillin 氨节青霉素 by basepair 碱基对 complementaryDNA 互补DNA deoxyribonucleicacid 脱氧核糖核酸 deoxyribonucleosidetriphosphate 脱氧核昔三磷酸 ethylenediaminetetraaceticacid 乙二胺四乙酸 humangrowthhormone 人生长激素 isopropylthio-R-D-galactoside 异丙基硫代一p-D一半乳糖昔 LB Luria-Bertani MCS multiplecloningsites 多克隆位点 OD opticaldensity 光密度 PBS phosphatebuffersaline 磷酸缓冲盐溶液 cytomegaloviruspromoter 巨细胞病毒启动子 polymerasechainreaction 聚合酶链式反应 RNase ribonuclease 核糖核酸酶 SDS sodiumdodecylsulfate +二烷基硫酸钠 TE Tris-HC1-EDTAbuffer Trig trishydroxymethyl-aminomethane 三经基氨基甲烷 X-gal 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-(1-D-galactoside 5-澳-4-氯-3-叫噪-P-D一半乳糖昔 人生长激素基因的克隆及暂态表达 硕士研究生: 史艳晖 指 导 教师: 杨佩满 教 授 指 导 小组: 马郁芳 副 教 授 于丽教 高级实验师 专 业 名称: 人体解剖与组织胚胎学 摘 要 本文属于:为了解决供不应求的矛盾，利用乳腺生物反应器进行 大量生产人生长激素(humangrowthhormone，hGH)的课题的前期工 作，即hGH基因的克隆、鉴定，及其暂态表达 飞首先进行人正常、新鲜胎盘的基因组DNA的提取，并根据hGH基 因组DNA的序列设计引物，进行PCR扩增;将得到的PCR产物与pT7Blue T-Vector这一PCR产物的特异性克隆载体进行连接，并对连接体进 行的。互补筛选，质粒的大小、酶切及PCR扩增等鉴定，其中的每一 个步骤都符合预期结果。为了检测该克隆墓因的表达情况，又将其插 入pLNCX这一真核表达载体。并经测序证明:所得到的hGH基因是正 确的，且其正向插入表达载体。最后，利用多聚阳离子脂质体将构建 好的携已被证明正确的hGH基因的真核表达载体(即pLNCX-hGH)及