人骨形成蛋白27成熟肽编码区基因克隆和真核表达载体的构建.pdfVIP

入骨形成蛋白2和7成熟肽编码区基冈克隆和真核表达载体的构建 中文摘要 人骨形成蛋白2和7成熟肽编码区基因克隆 和真核表达载体的构建 硕士研究生：卢春生 导 师：廖伟娇 教授 中文摘要 骨的愈合有三个重要的因素：一为骨质再生细胞(骨间质干细胞，定向造骨 细胞)，二为骨质诱导蛋白(生长因子)，三为愈合区域的环境(载体和来源组织)。 在目前的整形外科手术中，组织工程学技术可以利用一些生物活性物质，如骨形 成蛋白(bonemorphogenetic growthfactor-bate， 是一类酸性糖蛋白，属于乙型转化生长因子(transforming TGF-13 S)超家族，能够诱导促进软骨和骨的形成，在胚胎发育过程中发挥重要的 作用，包括脑的发育和骨的形成。BMPs在体外与多种不同性质的载体连接，可 以组成各种类型的有生物诱骨活性的骨修复材料，在矫形外科等领域有广泛的应 用前景及重要的应用意义。目前最少有20种BMPs被确认，这些BMPs被广泛应 用于骨的再生、牙质的生长和肾脏细胞的牛长发育等研究中。 BMP-2是BMPs中生物学活性最高的蛋白之一，也是研究最为广泛的生长因 子之一，其主要生物学作用是诱导未分化的间质细胞分化增殖，形成软骨和新生 骨。直接局部应用BMP一2，因为药物的弥散和免疫反应，疗效较低。垫麈里挂基 因技术将编码BMP一2的基国导入恰当的靶细胞内，使之连续释放BMP一2，并以自． ·——，—、～—，，--———、——、—————、，———————————————————、_————，一 忿丝墓麦盆丝盥皿型澎豳主塑绝望：则可以大大弥补外源性细胞因子局部应用的 缺陷。BMP一7最初从骨基质中分离纯化得到，其功能是调控骨和软骨的发生，它 与早前从牛成骨蛋白提取物中分离的成骨蛋白1(osteogeneticprotein，OP一1) 是同一种蛋白。BMP一7具有细胞因子的特点，用量少而能发挥很大的作用，但它 进入体内后易随体液流失降解，且半衰期短，不能局限在骨缺损局部发挥作用， 因此必须寻找更有效的替代方法，使其稳定表达，基因治疗成为备选的方法之一。 2 人骨形成蛋F{2和7成熟肤编码区基冈克隆和真核表达载体的构建 中文摘要 BMP一2和～7基因开放读码框(openreadingframe，ORF)均可编码由信号肽、 前肽和成熟肽组成的多肽，由蛋白酶切去信号肽和前肽后可得到有功能的成熟 肽。在本研究将利用基因重组技术，从BMP-2和一7基因表达量丰的骨肉瘤细胞 中克隆两基因的成熟肽的基因序列，并构建它们的真核表达载体。实验中应用的 真核表达载体为pcDNA3．1(+)。 结果显示：本研究已成功克隆和构建了BMP-2和一7成熟肽的真核表达载体， 重组子序列与Genebank中登录的序列完全一致。实验结果可为在骨修复和细胞 分化增殖等方面得到广泛应用，可为应用BMP-2和一7进行基因治疗等提供有力 的实验支持。 关键词：人骨形成蛋白成熟肽克隆真核表达载体 人骨形成蛋白2和7成熟肽编码区基冈克隆和真核表达载体的构建 英文摘要 andconstructionof vectorofthe Cloning eukaryaexpression mature ofhumanbone 2and7 peptide morphogeneticprotein Master DegreeCandidate：luchunsheng iaoProfessor Mentor：liaoweij