在乳腺癌中trf2与traf4结合及其对traf4核浆穿梭的影响.pdfVIP

目录 一、摘要 中文论著摘要……………………………………………………………………l 英文论著摘要……………………………………………………………………4 二、英文缩略语………………………………………………………………………7 三、论文 前言目Ⅱ舌 …………………………………………………………………………8一………………………………………………………………………… 材料与方法……………………………………………………………………9 实验结果………………………………………………………………………ll 讨论……………………………………………………………………………14 结论……………………………………………………………………………19 四、本研究创新性的自我评价……………………………………………………20 五、参考文献………………………………………………………………………2l 六、附录 综述……………………………………………………………………………26 致1谢……………………………………………………………………………35 个人简介………………………………………………………………………36 ·中文论著摘要· 浆穿梭的影响 刖 菁 nemosisfactor 肿瘤坏死因子受体相关因子(Tumor receptor-弱sociatedfactor， 11RAF)是一类重要的胞浆衔接蛋白，它们参与多个细胞内信号转导通路，引发相 应的基因活化，其中最主要的是引起NF．心和JNK的活化，从而调节正常和肿瘤 细胞的增殖、存活、凋亡并诱导内皮细胞出芽等。迄今为止共发现7种TRAF$家 族成员，参与多个细胞内信号转导通路的活化，免疫共沉淀试验表明，刺激TNF 细胞核表达尚未见与其它TRAF家族成员相互作用的报道。 本实验主要应用基因的转染／干扰，免疫荧光染色／激光共聚焦，免疫共沉淀， Western 核浆穿梭及其生物学功能分析。 材料与方法 1、材料 正常乳腺上皮细胞系MCF．10A，人雌激素受体依赖性乳腺癌细胞系MCF．7 (低转移)，人雌激素受体非依赖性乳腺癌细胞系MDA．MB．231(中转移)和 MDA．MB．435s(高转移)。 2、方法 (1)细胞培养：正常乳腺上皮细胞系MCF-10A，，低转移性乳腺癌细胞系 MCF．7以及中转移性乳腺癌细胞系MDA．MB．231，高转移性乳腺癌细胞系 MDA。MB-435s, (2)免疫荧光染色：检测TRAF2与TRAF4的核浆定位及其共定位。 (3)转染：按照LipofectAMINE2000说明书操作。 (4)免疫共沉淀：检测TRAF2与TRAF4的结合状况。 (5)应用Western 扰TRAF2前后TRAF4的变化。 (6)应用流式细胞仪检测转染和干扰TRAF4后，细胞的侵袭性改变。 勿七 电 皇口7卜 及在胞浆中的共定位 在MCF．7细胞中可看到TRAF2在细胞浆中阳性表达，呈现胞膜胞核红色荧 光染色；TRAF4在胞膜胞浆及胞核中均呈现绿色荧光表达；通过激光共聚焦显 微镜可以观察到TRAF2与TRAF4共定位于细胞浆中，呈现黄色荧光显色。 2、免疫共沉淀检测TRAF2和TRAF4在乳腺癌细胞系中的结合情 况 度转移)、MDA．MB．435s(高转移)四种细胞系中均结合。 的核浆穿梭 (中度转移)细胞系中，TRAF4的核蛋白表达量降低，而胞浆中TRAF4的表达 量增高。 抑制作用 2 细胞凋亡率为2．26％，表明TRAF4可抑制乳腺癌细胞凋亡。 结论 1、在正常乳腺上皮细胞系MCF．10A及乳腺癌各种侵袭度的细胞系中TRAF2 核与细胞浆中均有表达；免疫荧光／