在胃癌细胞表面建α-gal表位的研究.pdfVIP

。 中 文 摘 要 利用pET—15b表达系统以可溶性形式在大肠杆菌中表达鼠源性n—l，3一半乳糖 基转移酶的催化结构域，利用其在人胃癌细胞表面构建口一ga【表位(Galn1—3Gal—Bl一 4GI心“娃一R)，拟蒲寒镧备一种新的自体瓣瘿疫苗。该蛋自由于缺少了跨膜区及臆质送 域，保证了它的可溶性。带有H毽一tag的目标蛋白分子量约为35kDa。利用高效液相 色谱阴离子交换柱分离、分析酶的底物尿嘧啶二磷酸半乳糖和催化产物尿嘧啶二磷酸以 检测酵的活性。根据在260m波长测得泵嘧睫=磷酸半乳糖的减少量及尿嘧啶：磷酸 的生成量，计算得到酶的活性为1．75删旌。利惩a—l。3一半襞糖蒸转移酶的催化结构 二抗体，用流式细胞仪检测荧光强度，以分析a—gaI表位的表达结果。流式细胞仪检测 结果显示酶反应组的荧光强度骧显高于没有a—l，3一半襞糖基转移酶的砖照组，证暖了 在胃癌细胞表面成功构建了a—gal表位，为该方法的临床治疗的应用打下坚实的基础。 关键词a一1，3一半乳糖基转移酶；a—Gal表位；催化结构域；胃癌；肿瘤疫苗 O ABSTRACT d鼬ain《m淑inea Firsdy，est赢lish称牟鹳《ons粥tem．mp鼹5bto麟p粥scatalytic of is solublef。rm证E．∞H．Theaimthis tout批ze 一1，3一g出c删托哪《eraSe蕊a study the to onst。rnachcancerceUsaSanI，vdn靴饼、，毫la：me． eIlzymesynthesizea—galepi地pes ofthe is thereactantsa聪 His—tag Molecularweightpr嘶赫试th 35缸h．霹她analyze c。hnnto 艄zyma如prodtlcts匆}母￡-c诫th8赫∞exchange resul坞of andm∞easeofUDPat totheme鹅urem甑t 260呦，calcu— decr∞se《UDP—gal kethe ofthe iS1．75 U／Inl．M∞觥r do啪in《a一1，3一 activity en驷e u鸵cataIytic onhuf嘲斑髓8chcancerce：Ils．髓leni船uht— gal韪穗苟rln∞sferasesynth器is珏一ga量epito|peS edthecells埘ch aSthe h嘲sen张and诚th withFITe o“ne越ci—hu“lmIgGcoupkd fhJ0rescent flaw