去分化间充质干胞再成骨分化潜能研究.pdf

细菌纤维素的生物相容性及联合BMP2 的成骨效应 中文摘要 中文摘要 第一部分：去分化间充质干细胞的诱导及生物学特性 目的：诱导去分化间充质干细胞(De-differentiated mesenchymal stem cell, De-MSCs) ，研究其生物学特性，为全面研究De-MSCs 提供物质基础。 方法:从健康成人骨髓中分离培养出间充质干细胞（Mesenchymal stem cell, MSCs ），经流式细胞仪(FACS)表型鉴定后采用更换培养基方法诱导去分化间充质 干细胞(De-MSCs) ，观察De-MSCs 形态学变化，FACS 检测De-MSCs 细胞表型， cck8 （Cell count kit ，CCK ）检测比较MSCs 和De-MSCs 增殖效率差异。 结果： De-MSCs 形态上回复到 MSCs 样长梭形，流式细胞仪分析结果显示 De-MSCs 表达MSCs 某些干细胞表面标志，cck8 法检测细胞增殖率表明De-MSCs 相比MSCs 有较高增殖效率。 结论：De-MSCs 在形态和干细胞表面标志表达上与MSCs 一致，但是增殖能 力更强，为MSCs 样细胞。 第二部分：去分化间充质干细胞体外再成骨潜能分析 目的：研究人骨髓来源的去分化间充质干细胞(De-MSCs)在体外再次成骨分 化潜能和效率，探讨De-MSCs 潜在临床应用价值。 方法:将MSCs 和De-MSCs 同时成骨诱导7 天成为MSCs-ob 和De-MSCs-ob， 分别采用实时定量PCR （qPCR ）检测成骨相关基因，21 天后采用碱性磷酸酶（ALP ） 活性检测、茜素红染色法和形态学观察检测比较De-MSCs 和MSCs 成骨分化效率。 结果：qPCR 显示 De-MSCs 成骨相关基因 BMP2,Runx2,DLX5,Osterix,Beta-c 表达较MSCs 明显增强， ALP 活性检测与茜素红染色显示De-MSCs 具有较强成 骨能力。 结论：体外研究显示De-MSCs 再次成骨分化效率较高，为其临床应用提供实 验依据，为满足临床和组织工程需要提供更适宜的种子细胞。 I 中文摘要 细菌纤维素的生物相容性及联合BMP2 的成骨效应 第三部分：去分化间充质干细胞体内再成骨潜能分析 目的：去分化间充质干细胞(De-MSCs)作为优质种子细胞是目前组织工程和 再生医学领域研究的热点。本实验根据De-MSCs 体外再次成骨分化的结果，研究 De-MSCs 体内再次成骨分化潜能，评估De-MSCs 在骨组织工程中的潜在应用价值， 为进一步的临床应用提供实验依据。 方法：将De-MSCs 和MSCs 按照相同的浓度种植在胶原模块上，置成骨培养 基诱导 4 小时后将负载细胞的移植胶原模块入重症联合免疫小鼠(SCID)皮下进行 体内异位成骨实验，分别于7 天和28 天进行qPCR、碱性磷酸酶ALP 活性检测和 HE 组织切片，免疫组化观察。 结果：qPCR 检测分析显示 De-MSCs 较 MSCs 的成骨相关基因表达水平 (BMP2,Runx2,DLX5,Osterix,Beta-c) 高，且碱性磷酸酶 ALP 活性检测结果显示 De-MSCs 再成骨组较MSCs 成骨组高（p0.05 ），表明De-MSCs 在体内成骨分化 的效率较MSCs 高。HE 组织切片结果可见明显成骨现象，免疫组化结果见骨组织 中成骨细胞胞膜II 型胶原阳性表达。 结论：De-MSCs 具有更强的成骨分化潜能，可作为骨组织工程优质种子细胞 进行进一步的研究，为再生医学的应用提供更加丰富的理论依据和实验基础。 关键词：间充质干细胞(MSCs)，去分化间充质干细胞(De-MSCs) ，成骨分化， 成骨再分化，组织工程