小鼠第四脑室外隐窝室管膜细胞与妊娠关系的形态研究.pdf

中文摘要 小鼠第四脑室外侧隐窝 室管膜细胞与妊娠关系的形态学研究 摘 要 目的：对妊娠不同时期的母鼠第四脑室外侧隐窝进行系 统观察，探讨该部位室管膜与妊娠功能的关系。 材料与方法：选择3月龄，体重259±59正常昆明雌 性小鼠，与雄性小鼠同笼过夜，见阴道栓开始记日，妊娠7 天的孕鼠为早期组(8只)，妊娠14天的为中期组(8只)， 妊娠21天的为末期组(8只)：并选同龄雌性小鼠8只作为 对照组，共32只动物。分别用扫描电镜、光镜进行外侧隐 窝室管膜的观察；另外用NADPH—d组化方法对15只雌性小 鼠此部位也进行实验观察。1．光镜标本制备：动物腹腔内注 射6％水合氯醛(0．1ml／109体重)麻醉，经，心升主动脉快速 灌注37℃生理盐水，同时剪开右心耳，生理盐水灌注量60ml。 从右心耳流出的液体变淡后，迅速换成4％多聚甲醛磷酸缓冲 液(0．1M，pH7．2)进行快速灌注，动物出现抽搐僵直的现 象为最佳效果，快速灌注60ml后再慢速灌注此液60ml，整 个过程30分钟。灌注完毕墩出整脑，冠状方向去除脑桥以 上和延髓以下的部分，取中间脑组织块在上述固定剂中(4 ℃)后固定24小时，然后在磷酸缓冲液(0．1M，pH7．2)中 冲洗三次，每次6小时，然后梯度酒精脱水，100％浓度的酒 精脱水两次，入二甲苯中透明，浸蜡，包埋，修块，石蜡连 续切片，蛋白甘油载片捞片，60。C烤箱过夜。然后依次入二 中文摘要 甲苯脱蜡，梯度酒精置换，苏木精染色及伊红复染。酒精梯 度酒精脱水，二甲苯透明，中性树脂封片。室湿风干后，显 微镜观片，OLYMPUS万能显微镜照相。2．扫描电镜样品制备： 麻醉、灌注方法同光镜标本制备，但灌注液为1．5％的多聚甲 醛和2．5％戊二醛磷酸缓冲液(0．1M pH7．2)(多聚甲醛磷酸 缓冲液灌注前一天配出，44C保存：戊二醛在灌注之前再加 入多聚甲醛溶液)。灌注完毕取出整脑，然后经正中线切开 整脑，将脑分为左右两块在上述固定剂中(4。C)后固定12 小时。取-Nnff块从背侧移去小脑，暴露第四脑室底和外侧 隐窝，沿着中脑上端，延髓下端冠状方向将多余的脑组织去 除，之后将脑组织块放入磷酸缓冲液(0．1M pH7．2)中过夜 后，再用上述磷酸缓冲液冲洗切块三遍。然后梯度酒精脱水， 叔丁醇置换，二氧化碳临界点干燥，真空喷金，日立S-3500N 观察、照像。3．NADPH—d组化样品制备：动物的麻醉、灌注、 30％ 取材和后固定同光镜标本制备，然后标本块依次在15％季u 的蔗糖磷酸缓冲液(0．1M pH7．2)中浸泡(4℃)至沉底， 金华半导体制冷冰冻切片机切片，切片收集在0．1M的磷酸 X一100(0．1M 缓冲液中(pH7．4)清洗，再移入1％的Triton PB，pH7．4)，室温下预浸60分钟，然后将切片移入37℃孵 育液中孵育，孵育液的组成：lmg还原型尼克酰胺腺嘌呤二 (1％)。3小时后苒用(0．埘，pH7，4)磷酸缓冲液将切片冲 洗三次，每次5分钟，明胶载片捞片，裱片风干，中性红复 染，封片。室温风干后，显微镜观片，OLYMPUS万能显微镜 照相。 中文摘要 结果： 1光镜观察结果：光镜下对照组外侧隐窝室管膜 细胞单层排列，细胞呈立方形，室管膜下可见较丰富的小m 管。妊娠早、中期室管膜细胞密集，常呈双层或三层排列， 并在室管膜细胞增厚区上可见大量均质的絮状物，通过用图 像分析系统计数，结果表明妊娠早期组和中期组与对照组比 较具有显著差异(PO．05)，妊娠早期组和中期组比较无差 异(PO．05)，妊娠末期组和对照组比较无差异(PO．05)；