小鼠肾连接小管字三维重建及其细胞成分分析.pdfVIP

III I I I I lllll 1189l 89 1244IllIl8l I JYllllY1 目 录 一、摘要 中文论著摘要……………………………………………………………………～1 英文论著摘要……………………………………………………………………··4 二、英文缩略语………………………………………………………………………··7 三、论文 前言…………………………………………………………………………………………………………“8刖百…………………………………………………………………………………………………………“8 材料与方法………………………………………………………………………一8 实验结果…………………………………………………………………………13 讨论…………………………………………………………………………………………………………16 结论…………………………………………………………………………………………………………17 四、本研究创新性的自我评价………………………………………………………18 五、参考文献…………………………………………………………………………19 六、附录 综j丕…………………………………………………………………………………………………………20 在学期间科研成绩………………………………………………………………27 致谢……………………………………………………………………………………………28 个人简介…………………………………………………………………………29 ·中文论著摘要· 小鼠肾连接小管数字三维重建及其细胞成分分析 目 的 tubule，CNT)是肾单位和集合管之间的过渡小管。 。肾连接小管(Connecting 在走行上，来自浅表皮质肾单位和近髓肾单位的连接小管与集合管的相接方式不 同，走行的毗邻关系不同，并有种属差异。由于连接小管的上皮细胞成分由远曲 小管和集合管上皮细胞成分以及它自身细胞成分组成，因此，连接小管兼具远曲 小管和集合管的功能，同时又有连接小管细胞自身的重要功能，即微调Na、K、 H等离子和水的重吸收。此外，免疫细胞化学技术显示，连接小管细胞上存在激 肽释放酶，具有扩张血管的功能。此段小管虽然对钠、氢和水的转运不是最主要 的节段，但是，对肾的重吸收的整体调节包括肾血循环和激素调节起重要的反馈 作用。本研究借助计算机强大的图像处理和编程功能，对小鼠肾连接小管走行进 行追踪，并在三维可视化的同时测量其长度。在此基础上，采用免疫组织化学方 法，通过三维追踪的数据，对两种髓襻肾单位的连接小管的上皮转运体的分布进 行研究，从而分析连接小管复杂细胞成分的分布。 实验方法 1、树脂连续切片的标本制备 肾组织取自3只体重为259的C57／BL／6J小鼠。腹主动脉灌流固定(1％戊二 醛)，同等缓冲液续固定过夜。垂直于肾长轴取组织块，锇酸后固定，梯度酒精丙 酮脱水置换，树脂812包埋。采用超薄切片机进行半薄切片，从肾被膜到肾乳头， 共得到2．5 gm厚的连续切片2000张左右，甲苯胺蓝染色。 2、显微图像获取与配准 应用“计算机．显微镜一数码相机”图像采集系统，每隔一张切片进行拍照。图像 大小为2596×1889像素，每个像素相当于1．16 lxm×1．16Ixrn。图像配准引进丹麦 平台上进行操作。简言之，通过比较相邻两幅图像中生理对应点的像素灰度值的 相似性，得出相邻两幅图的相对变换值(平移距离和旋转角度)，计算相对变换值 的相加函数，得出系列图像中每个图像的绝对变换值，从而实现图像配准。 3、数字追踪及三维分析