微卫星dna在交系小鼠遗传监测中的应用.pdfVIP

郑州人举2007年硕l研究牛毕业论立= 微f!星DNAn近交系小鼠遗传雌测中的麻用 微卫星DNA在近交系小鼠遗传监测中的应用 研究生 李雷 导师 王纯耀张钦宪 郑州大学基础医学院组织胚胎学教研室 郑州大学实验动物中心 河南 郑州450052 ． 中文摘要 strain 近交系小鼠(Inbred mice)是指经连续20代以上的全同胞兄妹或 亲子交配培育而成品系内所有个体都可追溯到起源于第20代或以后代数的一对 共同祖先的遗传群。采用近交系的动物可以提高实验结果的准确性、可比性和可 重复性，减少实验动物数量和实验重复次数。近交系小鼠的显著特征是基因纯合 性及遗传稳定性，但在培育、保种及繁殖生产过程中，存在着发生遗传污染或遗 传变异的可能，所以有必要对近交系小鼠进行严格、长期、定时的遗传监测。一 些传统的方法如：皮肤移植、生化标记等通过检测其表型变化来推测其基因变化 的方法有明显的局限性。 tandem 微卫星DNA是核苷酸短串联重复序列(shortrepeats)，具有分布 广、数目多、稳定、易于扩增等特点，采用PCR扩增微卫星DNA可直接检测DNA 水平的变化，能够全面地反映出基因组的遗传概貌及变异情况，是近交系动物理 想的遗传监测标记。本研究采用lO条染色体上的20个微卫星DNA位点对近交系 小鼠的DNA多态性进行研究：提取小鼠基因组ON^并利用微卫星引物PCR扩增， 然后通过变性聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染显色等技术显示微卫星DNA扩增产物。 最后采用遗传学数据分析方法进行分析，以期筛选出具有显著多态性的微卫星位 点，用于近交系小鼠的遗传监测。 YYHL小鼠)及一个封闭群小鼠(昆明小鼠)各五只。用酚一氯仿抽提法提取小鼠 的基因组DNA，用PCR扩增以下位点：04 郑州人学2007年颂l研究生毕业论史 微p星DNA曲，近交系小鼠遗传豁测中的心用 D13mitl8，将PCR产物与等位基因分型标准物同步高压4-6％变性聚丙烯酰胺凝 胶电泳，电泳后经过固定、染色、显色观察带型。根据DNA在变性聚内烯酰胺凝 胶上泳动的距离，通过微卫星基因座扩增条带与对照等位基因分型标准物的比 较，进行结果判读并统计八品系小鼠在这些位点上表现出多态性条带的数目。扩 增结果按Lynth氏法计算相似系数并分析其相似性。 结果： 1．近交系小鼠纯合性的分析：不同近交系品系及同品系不同个体小鼠之间的 扩增产物中，同一微卫星位点呈现一清晰条带，表明河南省及全国目前有关这些 近交系小鼠及其群体没有发生遗传污染或遗传变异，符合近交系的要求。 2．不同品系近交系小鼠之阳J微卫星多态性比较的结果： (1)：不同品系近交系小鼠之问微卫星多态性比较：在20个微卫星位点中有 扩增产物电泳距离一致，表现为单态性，即不具有多态性。 与C3H／HeJ的相似系数分别为O．650，反映出二者亲缘关系较近：其次是FVB／NJ 相似系数分别为0．350。而封闭群昆明小鼠与BALB／C的相似系数为O．700，可见 二者亲缘关系最近；昆明小鼠与C3H／HeJ的相似系数为O．450，二者亲缘关系最 远。昆明小鼠与YYHL小鼠、DBA、C57的相似系数中等，为0．550。 3．同一品系内不同个体之间微卫星多态性分析：在20个位点上同一品系内 的小鼠在同一位点扩增的产物条带动距离相同，表现为单态性：各位点呈现一条 清晰图带，且电泳距离一致。 结论： 1．经过20个位点检测，譬个近交系小鼠符合近交系要求，说明河南省及周边 2 郑州人学2007年何!If卅究生毕业论文 融I!晕DNA白近交系4、鼠遗传贿测中的应用 地区有)∈这些近交系小鼠及其群体没有发生遗传污染或遗传变异，符合近交系的 要求。 2．可以运用PCR稳定、特异、有效地扩增8个品系小鼠的微