籽鹅和东北白鹅制素活化素βlt;,bgt;亚基成熟区基因的克隆及原核表达.pdf

中文摘要 本研究应用现代分子生物学的研究手段和方法，对籽鹅和东北白鹅抑制素和活化素BB亚基 成熟区基因进行了克隆和原核表达。本试验采用普通的Trizol方法从籽鹅和东北白鹅卵泡组织中 提取总RNA，然后经逆转录酶反转录成cDNA，自行设计并合成一对特异性引物，应用逆转录 多聚酶链式反应(RT-PCR)技术，成功地扩增出耔鹅和东北白鹅BB亚基成熟区eDNA基因， 并定向插入pMDl8-T载体中，然后经PCR鉴定及限制性内切酶双酶切鉴定，鉴定正确的质粒进 行序列测定，用DNAstar软件将所测得的序列与GeneBank上发表的鸡抑制素和活化素BB亚基 基因序列比较．核苷酸序列基本一致，且籽鹅和东北白鹅抑制素和活化素BB亚基成熟区cDNA 与鸡的核苷酸同源性均达到99．7％，表明所构建的籽鹅和东北白鹅BB亚基成熟区基因序列是正 确的。 将筛选得到的籽鹅和东北白鹅抑制素和活化素BB亚基成熟区cDNA的阳性克隆子经双酶切 用IPTG诱导其进行表达，并制备了目的蛋白的包涵体，进行表达产物的SDS．PAGE凝胶电泳检 测。结果显示，表达的蛋白带均位于约34KDa处，籽鹅和东北白鹅INH／ACTBB亚基成熟区基 因获得表达。 本研究获得了耔鹅和东北白鹅INH／ACTBB亚基成熟区基因和原核表达重组质粒，并且获得 了籽鹅和东北白鹅该基因在大肠杆菌中