硫利达嗪对乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7的杀伤效应.pdfVIP

· 452 · 安徽医科大学学报 ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2015Apr；50(4) 硫利达嗪对乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF一7的杀伤效应 童斯浩 ，汪 毅 ，龚 理 ，钱振珏 ，柯章敏 ，鲍扬漪 摘要 目的 观察硫利达嗪对人乳腺癌细胞 MDA—MB一231 用于以后的肿瘤临床治疗。该研究以硫利达嗪作用 和MCF-7的凋亡作用，并探讨其机制。方法 采用 MTF法 于三阴乳腺癌 MDA—MB-231细胞和乳腺癌 MCF-7 测定硫利达嗪对细胞 的抑制作用，计算半数抑制浓度 细胞，观察其对乳腺癌细胞的周期变化及凋亡发生 (Ic。)；流式细胞术检测硫利达嗪对细胞周期分布和凋亡的 的影响，为乳腺癌的综合治疗提供实验依据，为临床 影响；比色法测定药物对细胞Caspase一3活性的影响；West— 研究奠定基础。 ernblot法检测凋亡调节蛋 白Bcl-2、Bax表达的变化。结果 硫利达嗪作用24h后 ，MDA—MB-231、MCF-7细胞增殖明 1 材料与方法 显呈剂量依赖性抑制 ，其 Ic。为 18、22tzmol／L。流式细胞术 结果显示，随着加入硫利达嗪浓度的提高，MDA—MB-231、 1．1 材料 MCF-7细胞均发生不同程度的Go／G 期阻滞、细胞凋亡程度 1．1．1 主要仪器 FACSCalibur流式细胞仪购于 增加及伴随胞内Caspase一3活性增加。各实验组与对照组比 美国BD公司；680全 自动酶标仪购于美 国BIO 较 ，差异均有统计学意义 (P0．叭)。Westernblot法结果显 RAD公司；8000DH型二氧化碳培养箱购于美国 示随着药物浓度的增加，抗凋亡蛋 白Bcl一2表达下调、促凋 Thermo公司；CKX41型倒置显微镜购于 13本 O 亡蛋白Bax表达明显上调 ，各实验组与对照组相 比，差异有 LYMPUS公司。 统计学意义 (P0．01)。结论 硫利达嗪对乳腺癌细胞 1．1．2 实验药物与细胞株 硫利达嗪购 自美 国 MDA—MB一231、MCF-7有显著的增殖抑制作用且可显著诱导 Gibco公司；乳腺癌 MDA—MB．231、MCF-7细胞株购 肿瘤细胞发生 Go／G 期阻滞及凋亡，伴随 Caspase一3活性 的 自中国科学院上海细胞库，本实验室传代保存。 上调，其毒性机制可能与肿瘤细胞 内抗凋亡蛋白Bcl-2下 1．1．3 主要试剂 高糖DMEM培养基、青霉素 一 调、Bax上调有关。 链霉素双抗、含乙二胺四乙酸 (EDTA)胰酶、二甲基 关键词 乳腺癌；硫利达嗪；周期 ；凋亡；Caspase一3；Bcl-2；Bax 亚砜 (DMSO)、胎牛血清购于美 国Gibco公司；流式 中图分类号 R737．9；R971．41 抗体AnnexinV—FICT／PI双染细胞凋亡检测试剂盒、 文献标志码 A 文章编号 1000—1492(2015)04—4052—07 细胞周期检测试剂盒、Caspase一3活性检测试剂盒购 乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，其发病 于中国贝博公司；MTT法检测试剂盒购于美国Sig— 率逐年上升且趋向低龄化；尤以雌激素、孕激素及人 ma公司；小鼠抗人 Bc1．2、Bax单克隆抗体购于美国 类表皮生长因子受体2表达阴性的三阴乳腺癌恶性 Abcam公司。 1．2 方法 程度更高，预后较差，如何有效针对三阴乳腺癌的新 药研究成为 目前乳腺癌治疗的重点_l-2]。硫利达嗪 1．2．1 细胞培养及药物配制 人乳