绵羊CCNG1基因克隆及表达分析.pdfVIP

遗 Hereditas(Beijing)2015年4月，37(4)：374—381 WWW．chinagene．013 研究报告 基因克隆及表达分析 高磊 1,2，沈敏 ，甘 尚权 1,2，杨井泉 ，一，张译元 ，2 1．新疆农垦科学院畜牧兽医研究所，石河子 832000； 2．新疆兵团绵羊繁育生物技术重点实验室，石河子 832000 摘要：细胞周期蛋白cyclinGI(CCNGI)是一个重要的细胞周期调控因子，参与哺乳动物颗粒细胞增殖、卵母 细胞成熟等繁殖生物学过程，但其在绵羊中鲜有报道。为了研究CCNG1基因对绵羊发情调控 以及季节性繁殖 的影响，文章对绵羊CCNG1基因进行了克隆和组织表达谱分析，利用Rea1．timePCR对该基因在多浪羊(常年 发，I~)-5中国美利奴羊(季节性繁殖)发情周期不同阶段性腺轴组织的表达变化进行 了实时检测。获得 了绵羊 CCNG1基因部分cDNA序列，其中编码区全长885bp，编码294个氨基酸 CCNG1蛋白结构经预测存在多个 磷酸化位点和蛋白激酶C磷酸化位点。CCNGI基因在所检测绵羊各组织中均有表达，但在卵巢与肾脏中为高 丰度表达；CCNGI在不同绵羊品种发情周期不同阶段性腺轴组织的表达变化规律基本一致，卵巢、子官、松 果体、垂体均是在发情期达到峰值。但是在发情期和发情后期卵巢 CCNG1的表达量存在显著的品种间差异 0．01)。研究结果表明，CCNG1可能通过参与卵泡的生长发育继而达到对绵羊发情和季节性繁殖的调控。 关键词：绵羊；CCNG1基因；克隆；表达；发情周期 M olecularcloningandtissueexpressionoftheCCNG1geneinsheep LeiGao ，M inShenr，ShangquanGan ，一，JingquanYang ，一，YiyuanZhang， i．AnimalHusbandryandVeterinaryInstitute．Xi啦iangAcademyofAgriculturalandReclamationScience，Shihezi832000China, 2．KeyLabortoryofsheepBreedingandDevelopmentTechnologyofXinjiangProdunctionandConstructionCrops，Shihezi832000 C ina Abstract：TheCCNG1geneencodescyclinG1，whichisanimportantcellcycleregulatorandhasbeenreportedtobe involvedinreproductivebiologicalprocesses，suchasoocytematurationandgranulecellproliferationinmammals．Butthe studyofCCNGIinsheephasbeenrarelyreported．ToexaminetheeffectsofCCNG1onesrtouscontrolnadseasonalbreednig insheep，wefirstclonedandcharacterizedtheexpressionlevelofhtesheepCCNG1gene．ThenbyReal-timePCR，wede- tectednadnaalyzedtheexpressionsofCCNG1geneatmRNAlevelsinthehypohtalamus—-piutitary—-ovary(HPO)axisindif- ferentstagesofanesrtouscycleinDuoLangsheep(non-seasonalbreeding)andMerinosheep(seasonalbreeding)．Theresults showedthattheopenreadingframeoftheshepe CCNG1gne eis885bpnilengthnadencodes294aminoacids．Bioinformatic analysisindicatedthatthesecondarystructureofthesheepCCNG1proteincontainedmul却lephosphorylationsitesandsome ProteinKinaseCph