流式结果分析JSS详解.pptVIP

流式结果分析 流式原理 流式细胞仪通常以激光作为发光源。经过聚焦整形后的光束，垂直照射在样品流上，被荧光染色的细胞在激光束的照射下，产生散射光和激发荧光。这两种信号同时被前向光电二极管和90°方向的光电倍增管接收。光散射信号在前向小角度进行检测，这种信号基本上反映了细胞体积的大小；荧光信号的接受方向与激光束垂直，经过一系列双色性反射镜和带通滤光片的分离，形成多个不同波长的荧光信号。 流式原理 流式常用细胞特征 细胞组成 细胞功能 大小 细胞表面/胞浆/核--特异性抗原 粒度 细胞活性 DNA, RNA含量 胞内细胞因子 蛋白质含量 激素结合位点 钙离子, PH值, 膜电位 酶活性 流式常用实验 1、细胞凋亡 2、细胞周期测定 3、膜电位检测 4、表面分子测定 流式检测细胞凋亡 磷脂酰丝氨酸（Phosphatidylserine, PS）正常位于细胞膜的内侧，但在细胞 凋亡的早期，PS可从细胞膜的内侧翻转到细胞膜的表面，暴露在细胞外环境中。 Annexin-V是一种分子量为35~36KD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，能与PS 高亲和力特异性结合。将Annexin-V进行荧光素（FITC、PE）或biotin标记， 以标记了的Annexin-V作为荧光探针，利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细 胞凋亡的发生。 　　碘化丙啶(propidine iodide, PI)是一种核酸染料