全人源抗肝癌噬体单链抗体的筛选、鉴定及其靶向性实验研究.pdf

摘要 目的：从全入源噬菌体单链抗体库中大规模筛选抗肝癌噬菌体单 链抗体(scFv)，鉴定萁特异性；以绿色荧光蛋白(EGFP)为示踪分子 构建、表达抗肝癌scFv与EGFP融合蛋白，体外、体内实验研究抗肝 癌scFv的靶向特异性，为肝癌的临床诊断和导向治疗奠定基础。 方法：用肝癌细胞系HepG。细胞和腮细胞系QSG-7701细胞对初级 抗体库进行正负淘洗富集以及ELISA筛选，选择与肝癌细胞反应强阳 性而与肝细胞反应弱阳性或者醺性的克隆进行免疫组化鉴定并测序。 测序盾构建阳性克隆SA3基因与EGFP融合基因的原核表达载体 达；变性条件下纯化的融合蛋白EGFP-SA3用稀释法复性以后与HepG： 细胞经体外孵育后在荧光显微镜下观察单链抗体SA3与肝癌细胞的 结合作用；然后通过尾静脉将其注射入荷肝癌裸鼠体内观察EGFP-SA3 的体内靶向作用。 结果：对抗体库进行三轮正负淘洗和富集，从第三轮淘洗后的 呈阳性反应的克隆，阳性率为35％，其中有3个克隆与HepG：呈强阳 择克隆SA3进行免疫细胞化学染色，结果与ELISA一致。免疫组织化 学结果表明SA3与肝癌组织和肝组织阳性率分别为?2。王％和8．3％，差