腹膜间皮细胞PPARγ的表达及其配体对CD40与ICAM-I的影响.pdfVIP

腹膜间皮细胞PPARγ的表达及其配体对CD40 和ICAM-I的 影响1 * 张云芳,阳 晓 ,张亚杰,孙玉玲,孔庆瑜,董秀清,叶晓箐,余学清 中山大学附属第一医院肾内科（510080） E-mail: yangxiao_999@ 摘 要：目的 观察过氧化物酶体增殖体激活受体 γ（PPARγ）在大鼠腹膜间皮细胞（RPMCs） 中的表达以及 LPS 的调节作用，并探讨 PPAR γ 天然配体 15d-PGJ2 及人工合成配体 Ciglitazone 对 RPMCs 表达 CD40 和 ICAM-I 的影响。方法 分离、培养 RPMCs，常规传代及 鉴定，取第二代细胞用于实验研究。LPS 不同浓度（0.1µg/ml，1.0µg/ml，10µg/ml，50µg/ml， 100µg/ml ）、LPS （1μg/ml ）处理后不同时间点及 15d-PGJ2（3µmol/L ）、Ciglitazone （10µmol/L）作用于细胞 36h后收集细胞。RT-PCR 检测 PPAR γ、CD40 以及 ICAM-I mRNA 表 达；免疫细胞化学检测 PPAR γ在 RPMCs 中的分布；Western 印迹检测 PPAR γ及 ICAM-I 蛋 白表达。结果 （1）常规培养的 RPMCs 表达一定量 PPAR γ，表达部位主要分布于 RPMCs 细 胞核内，细胞浆微弱表达；（2）随着LPS 浓度逐渐增大，PPAR γ蛋白表达水平呈逐渐增高 的趋势，LPS 浓度为 10µg/ml 时其表达为最高峰。LPS （1μg/ml）作用12h PPAR γ蛋白表 达最强，PPAR γ1 表达高于 PPAR γ2；之后显著降低，持续至 72h。（3）LPS 刺激后 RPMCs CD40mRNA 表达显著增强；15d-PGJ2、Ciglitazone 显著降低 CD40mRNA 表达 （P均0.01）。（4） LPS 刺激后 RPMCs ICAM-I 蛋白表达显著增加；15d-PGJ2 增加 LPS 介导的 ICAM-I mRNA表达 （P0.01），但显著抑制 ICAM-I 蛋白表达（P0.05 ）；Ciglitazone 对 LPS介导的 ICAM-I mRNA 和蛋白表达均有显著抑制作用（P 均0.05）。结论 RPMCs 结构性表达 PPAR γ；LPS 在一定 时间范围内对 RPMCs PPAR γ表达具有显著增加作用；PPAR γ 配体可显著抑制 LPS 介导的 CD40mRNA 和 ICAM-I 蛋白的表达。提示 RPMCs 功能性表达 PPAR γ，可能通过负性调节炎症介 质分泌而参与腹腔局部防御。 关键词：PPARγ；大鼠腹膜间皮细胞；CD40；ICAM-I；腹腔局部防御 我们以往的研究发现，人和大鼠腹膜间皮细胞功能性表达CD40，并上调细胞间黏附分子 -I (ICAM-I)的表达[1，2] ；高葡萄糖腹透液显著增加腹膜间皮细胞表达CD40 及ICAM-I[3，4] 。CAPD 相关性腹膜炎发生时，透出液中表达CD40L阳性巨噬细胞数显著增多，巨噬细胞表达CD40L 水平显著增加[5]。提示腹膜间皮细胞CD40 高表达及活化参与CAPD相关性腹膜炎。过氧化物酶 体增殖体激活受体γ （PPARγ）是核受体家族成员，为一配体依赖性核转录因子，参与体内 1 本课题得到了国家自然科学基金 ）和高等学校博士学科点专项科研基金 （20020556051 ）的资 助 * 通讯作者 -1- 脂肪细胞分化、能量代谢、细胞周期调控等多种生理、病理过程[6,7]。近年研究发现PPAR γ 表达于多种免疫活性细胞，在机体免疫调节和炎症反应中发挥重要作用[8,9,10]。有关腹膜间 皮细胞是否表达PPARγ及其作用目前尚无文献报道。本研究旨在探讨PPARγ在腹膜间皮细胞 中的表达 以及LPS 的调节作用 ，并观察PPAR γ天然配体 15d-PGJ2 和人工合成配体 Ciglitazone对腹膜间皮细胞CD40 和ICAM-I表达的影响。 材料和方法 一、材料 1. 实验动物：