法舒地尔下调哮气道炎症和抗氧化作用的机制研究.pdf

目 录 1 法舒地尔下调哮喘气道炎症和抗氧化作用的机制研究………1 1.1 中文摘要…………………………………………………………1 1.2 英文摘要…………………………………………………………4 1.3 前言………………………………………………………………8 1.4 材料与方法………………………………………………………10 1.5 结果………………………………………………………………27 1.6 附图表……………………………………………………………31 1.7 讨论………………………………………………………………39 1.8 结论………………………………………………………………43 1.9 参考文献…………………………………………………………44 2 英汉缩略词对照表………………………………………………47 3 致谢………………………………………………………………48 4 氧化应激与支气管哮喘气道黏液高分泌研究进展（综述）…49 2 法舒地尔下调哮喘气道炎症和抗氧化作用的机制研究 摘 要 目的：最近研究表明法舒地尔在哮喘中起着重要的作用，但目前 机制仍不十分清楚，因此本实验研究Rho 激酶 （Rho-kinase, ROCK ） -1 抑制剂法舒地尔在支气管哮喘（简称哮喘）中抗炎和抗氧化应激的 作用，探讨ROCK-1 抑制剂在哮喘中的作用。方法：本实验分三部分： 1. 动物实验：5～6 周健康BALB/C 雌性小鼠24 只，随机分为对照组、 哮喘组和法舒地尔组，每组 8 只。哮喘组和法舒地尔组用卵清蛋白 （Ovalbumin, OVA ）溶液腹腔注射与鼻腔滴入致敏和激发，法舒地尔 组在滴鼻前用法舒地尔干预，对照组给予同等剂量生理盐水。激发后 各组均测定气道反应性，行肺泡灌洗液（Bronchoalveolar lavage fluid, BALF ）细胞计数，肺组织苏木精—伊红 （Hematoxylin-eosin staining, HE ）染色和高碘酸—希夫(Periodic Acid-Schiff, PAS)染色，免疫印记 （Western Blot ）法检测NF-κB 、PNF-κB 、STAT6、PSTAT6 、TNF-α 和Rho 激酶-1，免疫荧光测定MUC5AC 的表达水平，ROS 荧光探针 -DHE 检测肺组织内活性氧族物质 （Reactive Oxygen Species, ROS ） 的表达情况。2. 细胞实验：分为对照组、屋尘螨组和法舒地尔组， 法舒地尔组先予法舒地尔 （浓度为45umol/l ）干预 1h 后，屋尘螨组 和法舒地尔组同时予屋尘螨（浓度为20ug/ml ）干预24h 后，用Western Blot 法检测NF-κB 、PNF-κB、STAT6、PSTAT6 、TNF-α 和Rho 激酶 -1，免疫荧光测定MUC5AC 及ROS 荧光探针-DHE 检测细胞内ROS 3 的表达情况。3. 临床实验：收集哮喘发作期患者16 例，随机分为常 规治疗组和常规+法舒地尔 （静脉输入，30mg/天）治疗组，每组 8 例，每组治疗疗程为1 周，收集治疗前后血清标本各一份，采用ELISA 法检测血清中IL-3、IL-4 、IL-17 和TNF-α 的浓度。结果：1. 动物实 验：（1）气道的增强呼气间歇 （Enhancedpause, Penh ）值变化：法舒 地尔组与哮喘组相比Penh 值降低，气道反应性降低 （P0.05 ）。（2 ） BALF 中细胞学变化：法舒地尔组与哮喘组相比白细胞总数、中性粒 细胞比例和嗜酸性粒细胞（Eosinophils, EOS ）的比例降低（P0.05 ）。 （3 ）各组小鼠肺组织镜下病理改变：哮喘组见大量炎症细胞浸润于 支气管及周围肺组织，其中以中性粒细胞和淋巴细胞最多，支气管及 肺泡腔内有渗出物，部分气管黏膜上皮坏死脱落，伴杯状细胞及平滑 肌细胞增生。法舒地尔组与哮喘组相比气道炎症明显减轻，MUC5AC 荧光强度减弱 （P0.05 ），气道内黏液分泌减少 （P0.05 ）。（4 ） 法