抗菌肽基因BnPCD842895克隆表达和活性检测.pdfVIP

中国油料作物学报 ２０１３，３５（４）：３５７－３６３ ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＯｉｌＣｒｏｐＳｃｉｅｎｃｅｓ ｄｏｉ：１０．７５０５／ｊ．ｉｓｓｎ．１００７－９０８４．２０１３．０４．００２ 抗菌肽基因ＢｎＰＣＤ８４２８９５克隆表达及活性检测 ２ １ ３ １ １ ２ １ 黄　金 ，黄军艳 ，柯　涛 ，周　誽 ，曹慧慧 ，马向东 ，童超波 ， １ ４ １ １ 于景印 ，吴　南 ，董彩华 ，刘胜毅 （１．中国农业科学院油料作物研究所，农业部油料作物生物学与遗传育种重点实验室，湖北 武汉，４３００６２； ２．湖北大学生命科学学院，湖北 武汉，４３００６２；３．南阳师范学院生命科学与技术学院，河南 南阳，４７３０６１； ４．中国科学院水生生物研究所，淡水生态与生物技术国家重点实验室，湖北 武汉，４３００７２） 　　摘要：为寻找新型植物抗菌肽，通过生物信息学的手段在全基因组范围内进行油菜抗菌肽基因的预测和分析， 初步筛选出与已知抗菌肽具有类似序列结构特征的候选基因ＢｎＰＣＤ８４２８９５。ＢｎＰＣＤ８４２８９５基因长度为１８９ｂｐ，编 码４８个氨基酸，通过ｏｖｅｒｌａｐＰＣＲ方法，将合成的抗菌肽基因克隆到ｐＥＴ３０ａ－ＥＤＤＩＥ－ＧＦＰ表达载体上。将大肠杆 菌中表达得到的包涵体融合蛋白在体外复性，并通过融合蛋白ＥＤＤＩＥ的自我剪切，从而获得不增加任何多余氨基 酸的抗菌肽产物。抑菌活性检测结果表明ＢｎＰＣＤ８４２８９５对革兰氏阳性菌和阴性菌都具有较强的抑菌活性。 关键词：抗菌肽；甘蓝型油菜；抗菌肽基因ＢｎＰＣＤ８４２８９５；融合表达；活性检测 中图分类号：Ｑ７８６　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１００７－９０８４（２０１３）０４－０３５７－０７ ＣｌｏｎｉｎｇａｎｄｂａｃｔｅｒｉｏｓｔａｔｉｃａｃｔｉｖｉｔｙｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆａｎｅｗａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌｐｅｐｔｉｄｅＢｎＰＣＤ８４２８９５ ２ １ ３ １ １ ２ ＨＵＡＮＧＪｉｎ，ＨＵＡＮＧＪｕｎ－ｙａｎ，ＫＥＴａｏ，ＺＨＯＵＲｏｎｇ，ＣＡＯＨｕｉ－ｈｕｉ，ＭＡＸｉａｎｇ－ｄｏｎｇ， １ １ ４ １ １ ＴＯＮＧＣｈａｏ－ｂｏ，ＹＵＪｉｎｇ－ｙｉｎ，ＷＵＮａｎ，ＤＯＮＧＣａｉ－ｈｕａ ，ＬＩＵＳｈｅｎｇ－ｙｉ （１．ＯｉｌＣｒｏｐｓＲｅｓｅａｒｃｈＩｎｓｔｉｔｕｔｅ，ＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＢｉｏｌｏｇｙａｎｄ ＧｅｎｅｔｉｃＩｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔｏｆＯｉｌＣｒｏｐｓ，ｔｈｅＭｉｎｉｓｔｒｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，Ｗｕｈａｎ４３００６２，Ｃｈｉｎａ； ２．ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅ，ＨｕｂｅｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｗｕｈａｎ４３００６２，Ｃｈｉｎａ； ３．ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＮａｎｙａｎｇＮｏｒｍａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｙａｎｇ４７３０６１，Ｃｈｉｎａ； ４．ＳｔａｔｅＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＦｒｅｓｈｗａｔｅｒＥｃｏｌｏｇｙ＆Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＨｙｄｒｏｂｉｏｌｏｇｙ， ＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｗｕｈａｎ４３００７２，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎｏｒｄｅｒｔｏｆｉｎ