creg对人动内皮细胞单层通透性的影响及调控机制的研究.pdfVIP

CREG对人动脉内皮细胞单层通透性的影响 及调控机制的研究 硕士生姓名： 王占胜 寺旨导教师： 韩雅玲教授 指导小组： 闰承慧 副主任技师 康建 副主任技师 张效林 主治医师 专业名称： 内科学 摘 要 目的：血管生成方法的探索给治疗缺血性心脏病带来了突破性进展， 其目的是通过增加有功能冠状动脉分支或侧枝循环，达到恢复缺血心肌 血供，改善患者症状和预后的目的。而血管通透性增加是血管生成序列 事件的一个环节。细胞因子和炎症介质大多数是通过改变内皮细胞(ECs) 肌动蛋白骨架，使ECs收缩或回缩，细胞faJ隙增大，导致细胞单层通透 隙形成，通透性增加。ElA激活基因阻遏子(CREG)是新近发现的一个 细胞转录调控因子，其在分化成熟的组织、细胞中广泛表达，而在去分 化的组织中低表达。已有研究表明CREG可促进体外培养的人血管平滑 通透性有何影响尚未见报道。本研究以体外培养的人动脉ECs为研究对 象，应用逆转录病毒载体介导CREG在动脉ECs中过表达及表达下调， ECs通透性的机制。 方法： 1．采用Transwell 透性的影响。 2．利用异硫氰酸盐标记的鬼笔碱对EO、EN及ES的肌动蛋白骨架 分布变化及加入VEGF中和抗体后对ECs肌动蛋白骨架F．actin重排的影 响。 3．应用免疫荧光染色的方法，在荧光倒置显微镜下观察培养融合至单 白VE．cadherin及紧密连接蛋白claudin．5表达变化的影响。 结果： 达下调的ES组单层通透性下降(O．03244-0．01l4)，与EN对照组 ELISA结果显示，与EN组 O．0376+0．0061)比较差异显著(P0．05)。 高(1 2．荧光倒置显微镜下，可见正常对照EN组ECs连接紧密，F．actin 主要分布于细胞膜，呈“花环”样，少量呈细丝状无序分布于胞浆，核周 偶有应力纤维形成。EO组ECs呈明显向心性回缩，细胞间隙增大，细 胞内F．aetin的构像和分布发生变化，边聚现象消失，细胞中心的F．actin 明显增多，出现大量的应力纤维，并呈非极性分布和呈典型的竹排样结 构。ES组的F．actin主要分布在细胞周边，中心也有少量分布。加入VEGF 中和抗体后，EO组肌动蛋白F．actin向细胞膜处转移，以细胞中心为主 的分布转变为以细胞周边分布为主，边聚现象有所恢复，相邻细胞间 F．actin相互连接，细胞内应力纤维形成有所减少。ES组与EN组则变化 不明显。 在血管ECs周边呈正常链状染色，连接紧密。EO组ECs粘附连接蛋白 VE．cadherin在血管ECs周边的正常链状染色减少或脱失，细胞间缝隙增 常链状染色较前增多，连接紧密：紧密连接蛋白claudin．5表达较前增多。 ES组与EN组则变化不明显。 2 结论：CREG过表达可能通过VEGF介导的信号途径引起体外培养的 蛋白claudin．5表达减少，使血管ECs单层通透性增加。 claudin．5 关键词：CREG血管内皮细胞细胞骨架VE．eadherinVEGF 内皮通透性 3 TheeffectsandmechanismofCellular of Repressor ElA．stimulatedGenesonhumanvascularendOthelial cell monolayerpermeability Master