microrn-145介导oct4表达以促进子宫内膜癌细胞分化的机制研究.pdf

中文摘要 Mi croRNA-1 45介导OCT4表达以促进子宫内膜癌 细胞分化的机制研究 摘 要 Carcinoma)是女性生殖道常见的三大恶性 子宫内膜癌(Endometrial 肿瘤之一，严重影响了广大女性的生殖健康和生活质量，且近年来由于环 境因素的变化和女性激素的滥用，其发病率呈显著上升趋势。影响子宫内 膜癌预后的因素诸多，其中以肿瘤细胞的分化程度尤为重要。细胞的分化 越差，则患者的预后越差。肿瘤细胞与其来源的细胞相比，主要表现为低 分化和高度增殖的特性，分化程度越低，细胞增殖越快，肿瘤的恶性程度 越高；而分化程度高的肿瘤则接近正常组织，生长缓慢且预后好。既然分 化障碍与恶性肿瘤的形成密切相关，那么诱导肿瘤细胞向正常细胞分化， ‘ 从而达到治疗甚至治愈肿瘤的目的，就成为众多学者的研究方向。但迄今 为止，除高效孕激素可用于孕激素受体阳性的高分化子宫内膜癌外，其它 有效的可用于复发、转移或低分化癌的诱导分化剂还未见报道Q stemcell．1ikecells， 、 卡量的研究表明，肿瘤干细胞样细胞(Cancer CSCI。Cs)在肿瘤的发生发展中起着非常重要的作用。干细胞研究在过去 十年的飞速发展促进了肿瘤干细胞学说的发展。有学者认为肿瘤组织主要 由三种细胞组成：1、具有无限增殖能力和形成新的肿瘤克隆的肿瘤细胞， 即所谓的“肿瘤干细胞；2、具有有限增殖能力但不能形成新的肿瘤克隆 的细胞：3、丧失了上述两种能力的肿瘤细胞。其中肿瘤干细胞虽占少数， 但由于其具有自我更新、无限增殖和多向分化潜能等干细胞特性，成为肿 瘤发生、发展和转移的根源。维持干细胞多能性的关键因子OCT4在处于 未分化状态的CSCLCs中呈高表达，在由不同分化状态细胞组成的肿瘤组 织中表达明显降低，而上调OCT4可使干细胞维持其自我更新和无限增殖 的能力。这说明OCT4与肿瘤细胞的分化状态密切相关。抑制OCT4的表 达有可能诱导肿瘤细胞分化。并且已有学者证实，体外培养的肿瘤细胞株 具有肿瘤干细胞样细胞的特性，而裸鼠移植瘤内的细胞则由于体内微环境 的变化而呈现出不同的分化状态。 式与其靶mRNA的3’非翻译端的特定区域相互作用，引起mRNA的切割 中文摘要 降解，蛋白翻译抑制，进而影响靶基因的表达和作用。大量研究表明 miRNA表达的变化与人类多种肿瘤的发生和发展密切相关。但何种 miRNA能作用于靶基因进而促进肿瘤细胞向正常细胞分化，以达到治疗 中胚层来源的组织中呈高表达。因此miR．145在中胚层来源的子宫内膜组 织的细胞分化中很有可能起到了关键作用。已有研究证明，在胚胎干细胞 中OCT4作为miR．145的靶基因，受其抑制，引起胚胎干细胞向类胚体的 各胚层细胞分化。由此本研究设想是否miR．145在肿瘤细胞中也可通过调 控信号分子OCT4的表达，促进肿瘤细胞向正常细胞转化呢? 基于以上发现，本研究通过以下三部分进行探索：1、利用体外培养 OCT4的表达及相互作用关系。2、利用功能获得和功能缺失实验证实上 肿瘤治疗途径，从而提高子宫内膜癌患者的生存率和治愈率提供新的思 路 、． 水平的相关性研究 Ishikawa裸鼠移植瘤中的表达情况和作用关系。 方法：利用实时定量PCR(real—timePCR)和流式细胞技术测定体外 表达变化，找出它们相互间的变化规律；并利用荧光素酶报道基因的方法， 胞技术，证实miR．145是否通过蛋白翻译抑制来影响OCT4的表达。 呈高表达，流式细胞分析显示与ISO type同型对照相比，OCT4阳性细胞 培养细胞相比明显降低，流式细胞分析中OCT4阳性率仅为5％。与OCT4 2