p-eif2α家族性肌萎缩侧索硬化模型hsod1g93a转基因小鼠腰髓中的表达变化.pdfVIP

目 录 中文摘要…………………………………………………………… 1 英文摘要…………………………………………………………… 4 1G93A转基因 研究论文p-eif2a在家族性肌萎缩侧索硬化模型hSOD 小鼠腰髓中的表达变化 前言……………………………………………………………日lJ看…………………………………………………………… 88 材料与方法…………………………………………………… 9 结果…………………………………………………………… 16 附图…………………………………………………………… 18 附表……………………………………………………………25 讨论……………………………………………………………27 结论……………………………………………………………30 参考文献………………………………………………………30 综述PERK通路与肌萎缩侧索硬化……………………………．33 致谢…………………………………………………………………45 个人简历……………………………………………………………46 中文摘要 腰髓中的表达变化 摘 要 Lateral 目的：肌萎缩侧索硬化(Amyotrophic 见的运动神经元病，它以皮层、脑干以及脊髓的运动神经元的进展性变性 为特征，导致肌萎缩、瘫痪，最终因呼吸肌功能障碍而死亡。大约5％．10％ 的ALS是遗传性的(家族性)，大多数是散发的ALS。研究证实基因突变 与ALS的发病相关，SODl是第一个被认知的突变基因，在家族性的ALS 因小鼠的临床以及病理表现与人ALS极为相似，因此建立了许多表达人 是国际上公认的ALS的动物模型，用来阐述ALS的发病机制以及作为临 床药物研究的动物模型。作为一个多因素作用的疾病，除了基因突变外， 蛋白的错误折叠以及聚集、谷氨酸兴奋毒性、神经炎性、氧化应激和线粒 体的功能障碍、细胞骨架异常以及轴浆运输缺陷等也参与ALS的发病。 近年来，内质网应激作为ALS一个新的发病机制，被深入研究。 内质网作为分泌路径中一个重要的细胞器，参与了蛋白质的合成、折 叠和翻译后修饰，还参与脂类代谢、钙的存储，同时将这些合成与修饰后 的蛋白质运输到其他细胞器。内质网内蛋白折叠能力下降、钙平衡紊乱都 reticulum 会引起内质网应激(endoplasmic 易于在内质网腔内聚集以及形成包涵体，引起内质网应激。其主要通过未 折叠蛋白反应(unfolded protein reticulumassociated (endoplasmic SODl，减轻内质网负荷，恢复内质网稳态。若不能及时清除突变SODl， 在ALS的发病机制中具有重要作用。 中文摘要 通路激活的靶点，通过观察其在hSODlc狰3A转基因小鼠腰髓中的变化，来 究内质网应激在ALS发病机制中的作用。 方法： 1．动物模型的获得与分组 应，鉴定出含hSODlG93A基因的阳性小鼠和不含该基因的阴性小鼠。 早期组和终末期组均按照SnowRJ评分标准来评估。每组各3只，均设立 同窝同年龄对照。 2．观察hSODlG93A转基因小鼠脊髓中p-eif2a的变化 blot) 2．1蛋白免疫印迹法(Western 氯醛腹腔注射麻醉后，新鲜取出小鼠腰段脊髓，．80*0保存备用。提取腰 段脊髓总蛋白，通过Western 鼠不同时期的表达。 2．2免疫荧光化学染色 合氯醛腹腔注射麻醉后，用4％的多聚甲醛固定，取出腰段脊髓，浸泡于 4％多聚甲醛中备用。冰冻切片，每片厚20pro。通过免疫荧光化学染色观 察P．eif2a的表达。 2．3免疫组织化学染色 合氯醛腹腔注射麻醉后，用4％多聚