igf-1在糖病大鼠膀胱和腰骶背根神经节的表达.pdfVIP

中文摘要 IGF-1在糖尿病大鼠膀胱和腰骶背根神经节的表达研究 摘 要 目的：糖尿病性膀胱病是一种糖尿病并发的泌尿系统的疾病，主要由 糖尿病的周围神经病变引起的膀胱功能障碍，与其病程、是否系统治疗及 神经病变程度相关，而与性别、年龄无关。糖尿病膀胱神经病变主要累及 引起排尿反射出现异常，膀胱收缩力减弱，导致尿潴留或尿淋漓不尽，甚 至出现尿失禁。患者有下腹胀痛、尿频、尿急、尿痛而无力排尿等症状。 膀胱内长期存在残余尿液易引起泌尿系的感染，导致肾功能出现损害，甚 至发生肾功能衰竭。因此，糖尿病性膀胱病的早期诊断及治疗是十分非常 重要的，其机制研究越来越受人们关注。近年来，发现胰岛素生长因子．1 在神经元和肌肉中分布广泛，其化学结构与胰岛素相似，和其相应的受体 结合而发挥作用，促进神经细胞和肌细胞的再生，抑制其凋亡，在神经元 的生长、分化和能量代谢以及神经保护方面都起着重要的作用。本研究运 用免疫组化的方法，检测胰岛素生长因子．1(IGF．1)在糖尿病大鼠膀胱 和腰骶背根神经节组织中的表达变化，来探讨IGF．1在糖尿病性膀胱病的 发生发展中的作用。 方法： 1实验的动物及分组： l 测大鼠空腹血糖浓度(BG)，BG16．7mmol／L， l周后糖尿病组大鼠的 空腹血糖浓度(BG)l6．7mmol／L，说明糖尿病大鼠并发膀胱病变。 2标本的制作及免疫组化： 大鼠麻醉后，分别取实验组和对照组大鼠膀胱及腰骶背根神经节，生 瓶中进行固定，取O．5emx0．5cmx0．1cm组织块放入Citadel2000型脱水机 中文摘要 进行脱水处理后，高温熔解固体石蜡，在模具内包埋组织块； 免疫组化的试剂是采用河北博海生物工程开发有限公司分装美国 SANTACRUZ公司产品，按照说明书操作，具体步骤为： (1)将厚度5um的组织切片附于经多聚赖氨酸附膜的载玻片上，60℃ 过夜；(2)将切片放入二甲苯和酒精中脱蜡、入水(二甲苯中5分钟两次、 乙醇5分钟两次、75％乙醇5分钟两次)蒸馏水洗两次；(3)将切片放入 柠檬酸抗原热修复液中，微波炉加热后冷却至室温(100％火力一分钟、 孵育10分钟，消除内源性过氧化物的活性，蒸馏水冲洗1次，0．1MPBS洗2 次(每次5分钟)；(5)切片上滴加正常的山羊血清封闭液，在室温下放置 (7)切片上滴加生物素化第二抗体(IgG)，在37℃环境下放置20分钟， 色剂A、B、C各一滴加入试剂盒内，混匀，加至标本上，显色1分钟(显 微镜下观察显色效果)，充分水洗；(10)苏木素复染细胞核1分钟，取出 充分水洗，使其返蓝复染、脱水、烘干(1％盐酸酒精分化、1％胺水反蓝、 充分水洗、经70％乙醇5分钟、80％乙醇5分钟、90％乙醇5分钟两次、 95％乙醇5分钟两次、100％乙醇5分钟两次脱水、二甲苯透明5分钟两 次)、中性树脂封片；(11)结果的观察：光学显微镜下观察，细胞核或细 胞质内出现棕黄色或棕褐色颗粒为阳性细胞，根据着色强度和阳性细胞的 百分比，选择实验组和对照组的阳性和阴性组织相，进行100x和400×的 显微照相，读取数据。 3统计学分析： 应用SPSSl3．0软件包，血糖结果采用均数4-标准差表示，进行两个 的表达属于等级资料，需采用秩和检验，当P值O．05时具有统计学意义。 结果： 中文摘要 l血糖的变化 量资料，采用两个独立样本的t检验，对照组与糖尿病组比较 著的差异，说明本实验STZ造模成功，结果见Table．1及Fig．1。 2HE染色与免疫组化结果 光镜下见大鼠膀胱逼尿肌结构如下：对照组大鼠膀胱移行上皮排列整 齐，粘膜下及肌间神经丛多见，肌纤维整齐排列，肌束间排列紧密，肌间 隙内充满结缔组织，肌细胞大小一致；糖尿病组大鼠粘膜下有炎细胞浸润， 肌束排列紊乱、结构松散，肌间隙明显增宽，肌束间血管充血，逼尿肌细 胞肥大，形态不规则。根据上述结果，说明糖尿病性膀胱病大鼠造模成功。 免疫组化结果：IGF一1在膀胱粘膜下和膀胱逼尿肌细胞分布，与正常 组相比，糖尿病