hp联合胃癌抗致敏dc抗胃癌免疫的实验研究.pdf

目录 摘 要5 Abstract 7 英文缩略一览表9 第一章 前言 11 1 树突状细胞的生物学特征和功能 11 1.1 DC 的分化发育和表型变化 11 1.2 DC 的生物学功能 12 1.3 DC 的体外诱导和扩增 13 2 Hp 感染与胃癌的关系 14 2.1 Hp 感染与胃癌发生发展的关系 14 2.2 Hp 感染与胃癌预后的关系 15 3 Hp 与DC 的关系 16 3.1 Hp 对DC 成熟状态的影响 16 3.2 Hp 对DC 活化水平的影响 16 4 DC 疫苗在胃癌免疫治疗中的研究和应用进展 17 4.1 胃癌微环境与DC 17 4.2 DC 与胃癌预后 17 4.3 DC 疫苗与胃癌免疫治疗 18 5 研究的目的和内容 19 第二章 材料和方法20 1 材料20 1.1 菌株和细胞来源20 2 1.2 试剂和耗材20 1.3 仪器2 1 1.4 溶液配制2 1 2 方法 错误!未定义书签。 2.1 胃癌细胞BGC823 培养24 2.2 胃癌细胞裂解物的制备25 2.3 Hp 培养和鉴定 错误!未定义书签。 2.4 Hp 全菌超声裂解物的制备 错误!未定义书签。 2.5 人外周血MoDC 的诱导培养 错误!未定义书签。 2.6 T 淋巴细胞的培养27 2.7 流式细胞仪鉴定DC 表型27 2.8 混合淋巴反应 错误!未定义书签。 2.9 特异性CTL 的诱导培养28 2. 10 LDH 释放法检测特异性CTL 对胃癌细胞的杀伤效应28 2. 11 ELISA 法检测细胞因子IL-12 和IFN-γ 的分泌水平30 2. 12 统计学分析30 第三章 结果31 1 DC 形态学观察31 2 DC 表型鉴定结果32 3 致敏DC 刺激T 细胞增殖能力的研究35 4 各组特异性CTL 对胃癌细胞杀伤效应的比较35 5 细胞因子IL-12 和IFN-γ 释放的动力学曲线36 第四章 讨论 错误!未定义书签。 结 论42 3 本文存在的问题及今后应深入开展的研究43 参 考 文 献44 致 谢52 综 述53 4 Hp 联合胃癌抗原致敏DC 抗胃癌免疫的实 验研究 摘要 目的：探讨幽门螺杆菌 （Helicobacter pylori ，Hp ）联合胃癌抗原对人外周血单核 细胞来源树突状细胞（monocyte derived dendritic cell ，MoDC ）成熟和抗肿瘤功 能的影响，并筛选Hp 联合胃癌抗原致敏树突状细胞 （dendritic cell ，DC ）的较 优刺激时间。 方法: 利用密度梯度离心法分离外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell，PBMC) ，进一步通过贴壁法获得单核细胞，经RPMI-1640 完全培养基、细 胞因子rhGM-CSF （1000U/ml）和rhIL-4(500U/ml)诱导培养5 天后分化为未成熟 树突状细胞 （immature dendritic cell，iDC ），培养过程中每3 天半量换液和补充 细胞因子rhGM-CSF 和rhIL-4 。在培养第5 天分3 组，Hp 联合胃癌抗原致敏组 （Hp+Ly-mDC 组）加入胃癌细胞BGC823 裂解物0.1mg/ml，4h 后