α1,2-岩藻基转移酶基因转染对卵巢癌细胞rmg-i蛋白组学变化的影响.pdf

·中文论著摘要· 仅1，2．岩藻糖基转移酶基因转染对卵巢癌细胞RMG．I 蛋白组学变化的影响 刖 吾 卵巢癌在妇科恶性肿瘤中病死率居首位，五年生存率一直徘徊在20～30％， 主要原因是：①难以早期发现；②术后易复发；⑧化疗易产生多药耐药。卵巢癌 的发生机制一直是妇科肿瘤基础研究与临床研究的重点，掌握卵巢肿瘤恶性生物 学行为的分子机制对于卵巢癌的预防、诊断及治疗十分重要。上述问题的解决都 有赖于对其相关信号转导通路中信号分子的构成及其相互作用关系的阐明。 细胞膜上存在的糖复合物与细胞间的相互黏附、识别、细胞恶变、侵袭及转 移等细胞生物学特性密切相关。细胞癌变后细胞中的糖复合物，特别是细胞膜上 糖复合物中的糖链部分发生结构和量的变化，使其作为肿瘤标志物在临床工作中 被广泛应用。在卵巢癌，主要表现为II型糖链的变化，如Lewis X等组 Y及Lewis 织一血型抗原的改变。75％的卵巢癌出现Lewis Y不同程度的高表达；上皮性卵巢 肿瘤标志物CAl25的结构中含有Lewis Y结构，说明LewisY与上皮性卵巢肿瘤 关系密切。Lewis Y是双岩藻糖基化的寡糖。岩藻糖是终末糖基，其加入后糖链的 加工终止，糖链的结构不再改变。正常情况下，Lewis Y抗原主要表达于胚胎发生 时期，在成人其表达则限于粒细胞和上皮组织细胞表面。当上皮组织发生癌变时， 60％～90％的病人出现Lewis Y抗原表达明显增高，如卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、 结肠癌．禾Htb-+细胞肺癌等，且Lewis Y的水平与肿瘤的发展和预后相关。 Lewis y的上述特点使其成为肿瘤化疗的候选药靶。虽然目前针对Lewisy抗原 靶点的治疗药物已经进入II期临床试验，但是Lewis y与肿瘤发生、发展的相关机 制研究甚少，了解有哪些蛋白参与其过程非常重要。0【1，2一岩藻糖基转移酶基因 (futl)是Lewisv合成的关键酶，我们在前期研究工作中，通过将人类：futl基因稳 定转染入卵巢癌细胞系RMG．I中，成功构建TLewis y高表达细胞模型RMG．I．H。 并对其进行了相关系列研究，发现Lewis y作为众多受体表面的一部分，其表达增 细胞核HER2／neu等基因转录的加速，刺激DNA合成，加快细胞跳过G1期限制点 进入S期，从而促进肿瘤细胞增殖、粘附、侵袭、转移、耐药等恶性生物学行为增 强。信号转导通路网络复杂，Lewisv作用机制仍然不十分清楚。本文利用己建立 的卵巢癌细胞模型RMG．I．H与其亲本细胞系RMG．I进行研究，目的在于探索Lewis y高表达细胞中差异表达蛋白的构成、相互作用关系及其与肿瘤生物学行为的相关 性。为进一步研究Lewis y抗原高表达在卵巢癌中的作用机制及相关生物治疗提供 科研思路和理论依据。 方 法 第一部分：将转染缸fJ基因与转染空质粒载体的细胞系RMG．I．H与RMG．I．C 进行2-DE分析与MALDI．TOF．MS鉴定，从而获得Lewis Y高表达细胞中差异表 达蛋白的构成。利用蛋白间相互作用预测软件STRING，将蛋白质组学结果与相 应已完成的基因芯片结果联合建模，构建蛋白间的相互作用网络。通过检索UniPro 蛋白质数据库进一步分析差异表达蛋白的生物学作用与细胞定位。利用文献检索 软件PubMatrix建立检索矩阵，分析Lewi