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ROCK抑制剂在角膜缘干细胞体外扩增和保存中的作 用研究 摘要 第一部分 ROCK抑制剂在角膜保存中的作用研究 目的 通过在角膜中期保存液中添加ROCK抑制剂Y-27632，观察其对保存角膜 上皮细胞活性率、角膜缘干细胞增殖能力、角膜内皮细胞活性的影响。 方法 Y一27632的角膜中期保存液中，保存 新鲜兔角膜15只，4。C保存在含109M 时间为0、l、4、7、14天，未添加Y-27632的角膜中期保存液作为对照组。通 过检测角膜缘上皮细胞的活性率、干细胞克隆形成能力，分析Y-27632对保存 的角膜材料中角膜缘干细胞的影响；同时，使用台盘蓝一茜素红染色观察中央角 膜内皮细胞形态的变化并计数内皮细胞活性数，初步评估Y-27632对角膜内皮 细胞保存的影响。 结果 新鲜角膜材料在添加Y一27632的角膜保存液中保存7-14天，分离的角膜缘 上皮细胞仍具有较强的细胞活性率及克隆形成能力。对角膜内皮行台盘蓝一茜素 红染色显示，在添加Y-27632的角膜中期保存液保存14天后，角膜内皮细胞仍 能维持其正常形态，活性无明显变化。 结论 初步试验结果显示，Y-27632可作为角膜中期保存液的添加物，能够有效延 长角膜上皮和角膜内皮细胞在体外的保存时间。 关键词：角膜缘干细胞；角膜保存液；保存 『舢删㈣frllll Illll／fllllIJlIJII／册 第二部分 ROCK抑制剂在角膜缘千细胞冻存中的作用研究 目的 通过在角膜缘上皮细胞的体外扩增、冻存复苏过程中添加ROCK抑制剂 Y-27632，观察其对角膜缘上皮细胞活性和干细胞克隆形成能力的影响。 方法 将新鲜分离的上皮细胞或经过扩增的兔角膜缘上皮细胞冻存，根据冻存液及 101．tM。观察各组细胞冻存、复苏后细胞活性、克隆形成能力等情况，评价Y-27632 在角膜缘干细胞低温冻存、培养中的作用。 结果 在角膜缘上皮细胞培养过程中添加Y-27632，可显著促进细胞增殖，提高角 膜缘上皮细胞的克隆形成能力。将体外扩增后的角膜缘上皮细胞进行冻存复苏后 发现，只在冻存液中添加Y-27632的细胞，短期冻存复苏后的细胞，在细胞活性 和克隆形成能力未见显著改变，但中长期冻存(14天)复苏后的角膜缘上皮细 胞，在细胞活性、增殖和克隆形成能力有明显提高；在体外扩增和冻存复苏全程 中添加Y-27632时，角膜缘上皮细胞经过冻存、复苏后其活性、增殖能力和克隆 形成能力与其它组相比均有显著提高，且其活性和功能与冻存前的水平相当。 结论 Y-27632在低温冻存、复苏培养过程中对角膜缘干细胞具有明显的保护作用， 能够保持角膜缘干细胞活性，提高干细胞增殖和克隆形成能力。 关键词：角膜缘干细胞；细胞培养；羊膜；冻存 inthe oftheROCKinhibitor oftherole Preliminary study thecornea of preservation Abstract objective in solutionto R