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NCOA5 在结直肠癌中的表达、功能及机制研究 中文摘要 NCOA5 在结直肠癌中的表达、功能及机制研究 中文摘要 目的目的：：检测结直肠癌标本中NCOA5 的表达，分析NCOA5 表达与结直肠癌患者 目的目的：： 临床病理特征之间的关系；在结直肠癌细胞系 SW480 和 SW620 中沉默及过表达 NCOA5 ，研究 NCOA5 对结直肠癌细胞增殖、侵袭迁移、细胞周期的影响及其相关 机制。 方法方法：：收集临床结直肠癌组织标本，免疫组化及Western blot 检测 NCOA5 的表 方法方法：： 达。筛选结肠癌细胞株，得到 NCOA5 高表达细胞株 SW620 及 NCOA5 低表达细 株 SW480；构建三条特异性的干扰 NCOA5 表达序列及一条随机序列的慢病毒表达载 体感染 SW620 细胞株；Western blot 、CCK-8 法、流式细 、细胞划痕及 Transwell 实验分别检测干扰后 NCOA5 的表达、细胞生长增殖、细胞周期分布、细胞迁移的影 响；Western blot 检测 PI3K/AKT/ P9 信号通路和 PI3K/AKT/CyclinD1 、P27 信号通 路相关蛋白的表达。同时设计构建过表达NCOA5 慢病毒载体感染 SW480 细胞株， Western blot 检测 PI3K/AKT/ P9 信号通路和 PI3K/AKT/CyclinD1 、P27 信号通路相 关蛋白的表达。Western blot 检测 PI3K 抑制剂 LY294002 作用于过表达 NCOA5 的 SW480 细胞株后下游相关信号蛋白的表达。 结果结果：：分析结直肠癌标本的免疫组化及临床资料结果显示，NCOA5 在癌组织中 结果结果：： 高表达 （78.6% ），NCOA5 阳性表达率升高与肿瘤大小 （P0.001 ）、区域淋巴结转移 （P =0.005 ）、肿瘤 TMN 分期 （P =0.018 ）有关；Western Blot 显示结直肠癌组织中 NCOA5 表达较癌旁组织显著增高，表达率约为 75% 。体外成功构建慢病毒干扰载体； 感染结直肠癌细胞株 SW620 后，Western Blot 结果显示 NCOA5 表达下调，CCK-8 法 结果表明沉默 NCOA5 后细胞增殖能力下降 （P0.05 ），流式细胞仪结果显示干扰细 G0/G1 期比例增加，细胞划痕及 Transwell 实验表明沉默 NCOA5 后细胞迁移能力 下降，P-AKT 、 P9 和 CyclinD1 表达下降，AKT 表达基本不变，P27 表达升高。 慢病毒过表达载体感染结直肠癌细胞株 SW480 后，P-AKT 、 P9 和 CyclinD1 表达 升高，AKT 表达基本不变，P27 表达下降。LY294002 作用于过表达 NCOA5 的 SW480 I 中文摘要 NCOA5 在结直肠癌中的表达、功能及机制研究 细胞株后 P-AKT 、 P9 和 CyclinD1 表达下降，AKT 表达基本不变，P27 表达升高， 与干扰结果一致。 结论：1.发现 NCOA5 在结直肠癌组织中存在高表达，其表达与肿瘤大小、淋巴 结转移、TN 分期相关，具有作为肿瘤标志物的潜在价值； 2.下调 NCOA5 表达后，结直肠癌细胞株 SW620 增殖能力显著下降的，细胞周 期被阻滞在 G0/G1 期； 3