第六章第三节目的基因的克隆摘要.pptVIP

一 鸟枪法 二、 cDNA法 三 PCR法 四 化学合成法 第三节 目的基因的克隆 三 PCR法 二 cDNA法 一 鸟枪法 四 化学合成法 基因工程或DNA重组技术三大用途的前提条件是从生物体基因组中分离克隆目的基因，目的基因获得之后，或确定其表达调控机制和生物学功能，或建立高效表达系统，构建具有经济价值的基因工程菌（细胞），或将目的基因在体外进行必要的结构功能修饰，然后输回细胞内改良生物体的遗传性状，包括人体基因治疗。 一般来说，目的基因的克隆战略分为两大类：一类是构建感兴趣的生物个体的基因文库，即将某生物体的全基因组分段克隆，然后建立合适的筛选模型从基因组文库中挑出含有目的基因的重组克隆；另一类是利用PCR扩增技术甚至化学合成法体外直接合成目的基因，然后将之克隆表达。 1.鸟枪法克隆目的基因的基本战略 2.鸟枪法操作的改进 3.鸟枪法克隆目的基因的局限性 基因测序“鸟枪法”，也俗称“霰弹法”。简单地说，它有点类似生活中玩的拼图游戏。拼图游戏是将一个完整的画面分成杂乱无章的碎块，然后重新拼装复原。而“鸟枪法”则是先将整个基因组打乱，切成随机碎片，然后测定每个小片段序列，最终利用计算机对这些切片进行排序和组装，并确定它们在基因组中的正确位置。 “鸟枪法”最初主要用于测定微生物基因组序列。近年来，美国塞莱拉公司先后利